2019 ASCO | 循环肿瘤细胞CTCs在肿瘤免疫治疗中的研究进展

2019年5月31日-6月4日，第55届ASCO年会继续相聚芝加哥，今年会议主题是:

ASCO会议内容有许多关于液体活检的研究进展，今天我们通过ASCO会议来看看循环肿瘤细胞CTCs在免疫治疗和肿瘤免疫学中的相关报道。

研究背景：目前临床上部分患者能够从PD1/PD-L1抑制剂治疗中受益，也有有针对特定乳腺癌患者的临床试验。虽然我们知道乳腺癌的预后与CTCs有关且对分子靶向治疗的预测和监督至关重要，但PD-L1在CTCs中的表达尚缺乏研究, 且对PD-L1检测点抑制剂的预测生物标志物反应缺乏。因此，本研究试图探讨乳腺癌患者CTCs中PD-L1的表达与预后及临床病理特征的关系。

研究方法：通过基因探针杂交，分析20例原发性乳腺癌患者的CTCs和PD-L1基因在CTCs上的表达。采用卡方检验分析临床病理特征与CTCs中PD-L1表达的关系。采用Kaplan-Meier和单变量Cox比例风险模型分析比较高pd-l1表达和低pd-l1表达患者的生存率。

研究结果：

（1）在20名患者中，15名患者在其7.5ml外周血中检测到有超过1个CTC，在这15名患者中，每名患者至少有1个CTC显示PD-L1；

（2）将PD-L1在CTC上的表达分为低表达、中表达和高表达，然后给出低表达1分，中等表达2分和高表达3分，PD-L1高表达总分≥3，而PD-L1低表达总分<3；我们发现CTC上的PD-L1表达与肿瘤大小 (P=0.012) 淋巴结状态(P=0.001) 和PR状态 (P=0.037) 有关，大肿瘤组T2和T3之间存在显著差异(P=0.003) ;而在淋巴结状态组中N1 vs N3 (P=0.000) 中N2 vs N3 (P=0.015) 之间存在统计学差异；

（3）研究数据表明，与CTC上的低PD-L1表达相比，CTC上具有高PD-L1表达的患者总体存活率较差 (P=0.004) (表) ; 单变量Cox比例风险模型分析显示, CTC上高PD-L1表达是一个独立的预后因素。

结论：CTC上的PD-L1确实与一些不良的临床病理特征相关；CTC上PD-L1的高表达是较短存活的独立预后因素，与较短的生存期相关。

研究背景：CTCs中中先天性免疫检查点 (CD47) 和适应性免疫检查点 (PD-L1) 的检测有可能协助对监测免疫逃逸。在该研究中，评估了转移性乳腺(MBC)患者CTCs中CD47和/或PD-L1表达与临床特征之间的相关性。

研究方法：对98例MBC患者在一线治疗开始前进行血液采集。进行外周血单核细胞 (PBMC) 细胞角蛋白 (CK) 、CD47和PD-L1的三重免疫荧光染色在，并使用Ariol显微镜系统分析每个患者1*106 PBMCs。用MDA.MB.231 乳腺癌细胞作为对照，对CK+CTCs的CD47和PD-L1表达水平进行标化。

研究结果：

（1）22.4％（22/98）的患者检测到CK+CTCs；分别在41.9％和11.6％的CTCs中鉴定出高CD47和PD-L1表达，而在9.1％的CTC中，两种标志物均观察到高表达；

（2）在11.2％的患者中鉴定出具有至少一种标志物高表达（CD47-高和/或PD-L1-高）的CTC，尽管在三阴性、激素受体阳性和HER2阳性的原发性肿瘤患者中具有差异分布 (分别为27.3%、12.5% 、0%, p=0.040）；CD47-高和/或PD-L1-高的CTCs与疾病进展相关（27.8% vs 5.6%，p=0.005），与较短的PFS相关【中位数5.8（4.1~7.5）vs 13.3（11.4~15.2）个月， p=0.010】，而仅检测到PD-L1-高的CTCs与OS降低相关【中位数23.8（5.8~41.8）vs 35.7（29.9~41.4）个月，p=0.043】；

（3）多变量Cox回归分析显示CD47-高和/或PD-L1-高CTCs预测复发风险增加【HR：2.7（95％CI：1.3~5.7）; p=0.009】，而PD-L1-高CTCs与高死亡风险相关【HR：4.8（95％CI：1.4~16.6）; p=0.011】。

结论：免疫检查点CD47和PD-L1在mBC患者的CTC子集中共表达；在CTC上检测到高CD47和/或PD-L1表达与三阴性肿瘤、疾病进展和患者不良结果相关，并且可用于改善mBC中的预后；携带该类CTC群体的患者可受益于抗CD47和抗PD-L1免疫治疗。

研究背景：抗PD-L1检查点抑制剂（CPI）由于其持久的反应和耐受性显著提高了多种实体瘤患者的生存率。不幸的是，只有一小部分实体瘤患者（PTs）有客观反应。假设CTCs中的PD-L1和IRF-1表达可能与CPI反应相关，并对它们的表达进行初步评估。

研究方法：对转移性实体瘤患者行抗PD-L1单药或联合治疗。在3个时间点抽取7.5 cc的血液进行CTC评估：基线、1次CPI剂量后、开始CPI后3-6个月或停止CPI时。外周血CTC用Accuyte试剂盒分离，并进行CK/EPCAM、抗CD45、核染色、PD-L1和IRF-1染色。然后用Cytefinder软件识别CTC。

研究结果：

（1）已登记16例患者，患者中位年龄71岁（28~83）、中位ECOG = 1（0~3）；50％是女性；其中50％为NSCLC，13％为头颈癌，13％为乳腺癌，24％为其他癌种；

（2）在基线时期，有13位患者血液中鉴定到了CTC（＃CTCs范围在0~101），其中12位患者自开始CPI治疗时接受影像学扫描，根据RECIST 1.1（ 实体肿瘤的疗效评价标准 1.1 版 ），其中3位患者有部分反应（PR），1位患者有稳定疾病（SD），8位患有疾病进展（PD）；具有PR的患者在基线时期的CTC上IRF-1染色更常见（表），并且1/3的CTC PD-L1阳性；

（3）6例具有肿瘤组织PD-L1染色的结果可用于相关性分析，其中3例为PD-L1+（阳性定义为肿瘤组织PD-L1≥1％）；肿瘤组织PD-L1+的1位患者具有PD-L1+的CTCs；在肿瘤组织PD-L1-的3位患者中，1位患者具有混合的PD-L1+/PD-L1-CTC群，而另2位CTC没有检测到PD-L1染色。

结论：CTC的分离和计数在不同实体肿瘤中都是可行的。抗PD-L1的PR患者可能具有较高的IRF-1+CTCs；不过该结果仅为初步，更多的pts和样本正在评估中。

研究背景：免疫检查点抑制剂（ICIs）正成为许多肿瘤的标准治疗方案，但是有相当一部分患者对ICIs此反应不佳。单个生物标志物如PD-L1在预测患者获益方面不够准确。该研究试图扩展Epic Sciences无创液体活检平台，利用CTC分子分析和免疫细胞变化来识别ICIs的预测性外周血生物标志物。

研究方法：从接受ICIs治疗的前列腺癌、肾癌和膀胱癌患者中采集基线和治疗时的血液样本，并发送给EPIC科学。将核细胞铺在玻璃载玻片上，对CTCs进行免疫板染色（pan-ck，CD45，pd-l1和dapi），其中活化的细胞（cd4，cd8，ki-67和dapi），衰竭的免疫细胞（cd8，ki-67，pd-1，lag-3，tim-3和dapi）。免疫细胞和循环肿瘤细胞群的变化用高通量数字病理学进行评估。

研究结果：73%（24/33）患者中检出CTC，其中12%（4/33）患者中检出PD-L1+CTC。9个受试治疗样本中未检测到PD-L1+CTC。在14例匹配样本的患者的基线相比，在治疗样本中57%（8/14）患者的活化CD4+白细胞增加，36%（5/14）患者的活化CD8+白细胞的增加。在匹配样本的一个子集（14个样本中的6个）上进行耗尽分析。在基线和治疗样本中，一名患者的CD8+白细胞消耗量高于健康供体对照组，两名患者的CD8+白细胞消耗量低于对照组。从基线到治疗期间，未观察到耗尽的CD8+白细胞的变化。

结论：开发了一个基于液体活检的平台，可以同时测量单个外周血样本中CTC和白细胞的生物标志物。检测ICIs治疗后激活和耗尽的免疫细胞群的变化，并评估CTC上PD-L1的表达,下一步的工作是将免疫细胞和罕见细胞群分层。

• 研究地区：美国

• 摘要链接：http://abstracts.asco.org/239/AbstView_239_269637.html

研究背景：CTC是液体活检的细胞组成部分，对这些细胞的检测有助于鉴别残留疾病和预后不良的患者。然而，对于不同类型的CTC是否可以用来监测癌症干性（Stemness）和患者的免疫治疗反应尚不清楚。目前，用于监测CTC中癌干细胞标记物（如CD44或CD166）和免疫治疗靶点（包括PD-L1）的临床数据有限。本研究假设动态监测这些标记物的CTC阳性与NSCLC患者对免疫检查点抑制剂治疗的反应相关。

研究方法：作为外周血细胞前瞻性分析的一部分，纳入了30例接受免疫治疗（彭布罗珠单抗或阿托唑单抗）或联合化疗的NSCLC患者，每隔3-4周采集血样，最多24周。分离并分析外周血单个核细胞的CD45，鉴定非白细胞CTC的CD166和CD4，鉴定潜在CTC中的PD-L1和癌症干细胞标记物。根据Recist标准评估患者的反应。采用单因素方差分析对每个时间点的样本进行统计分析。

研究结果：

（1）在第二个时间点检测到的PD-L1+CD45-CTC减少与治疗初始反应最强相关；相反，与疾病稳定（SD）或部分缓解（PR）的患者相比，在疾病进展的患者中发现PD-L1+CD45-细胞数量增加（p = 0.01）；

（2）CD45-细胞、CD44+CD45-细胞、CD166+CD45-细胞显示出与临床结果无显著相关性；

（3）CTC上的基线PD-L1水平与组织上的PD-L1水平无关。

结论：报告了免疫治疗开始前后监测血中CTC表面标志物的可行性和潜在的临床意义, 发现免疫治疗无应答者中PD-L1+CTCs的增加值需进一步验证。

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