自身抗体检测的未来发展趋势: 定量检测

自身抗体是诊断自身免疫病的最重要依据之一，每种自身免疫疾病都伴有特征性的自身抗体谱，是早期诊断必不可少的生物学指标。患者血液中存在的高效自身抗体是自身免疫性疾病的特点之一，也是临床确诊自身免疫疾病的重要依据。某些自身抗体因对疾病的诊断具有高度的特异性已成为诊断相应疾病的金标准。

目前，随着体外诊断技术的发展，自身抗体检测方法也愈加多样化，包括间接免疫荧光法（IIF）、速率散射比浊法、放免法、免疫印迹、酶联免疫吸附试验（ELISA）、电化学发光法等。作为辅助诊断自身免疫性疾病的重要实验室指标，不同的检测方法均有自己独有优势和不足，而检测方法的敏感性和特异性相互依存的关系，决定了检测的性能和检测结果的可靠性。当敏感性增高时，特异性相应降低，反之亦然。在实际工作中，应该根据设定的临界值（cutoff）和检测方法本身固有的特性，合理选择合适的检测方法。如果作为一种筛查试验，敏感性高的检测方法应作为首选，并对假阳性的情况加以甄别；在确认试验中，应该选取特异性高的检测方法。当同一种抗体用不同方法检测的结果不同时，应通过更特异的检测方法进行确定。因此最终选择哪种检测方法，取决于实验室具体条件、试剂价格以及操作者的经验等。

由于医疗检测水平与国外存在较大的差距，且检测收费偏低等经济原因，部分医院检测自身抗体采用的是定性检测的方法，如免疫斑点法、免疫印迹法和金标法等，定性检测有着操作简单，成本较低的独特优势，但定性检测存在准确性差，易出现假阳性和假阴性结果，不能准确反映自身抗体量值等问题。诸如线性免疫膜条是定性检测的最常用的检测方法，是包被一种抗原的硝化纤维膜裁剪成后粘贴在膜条上制备，检测膜条上包被的抗原越多，粘贴次数越多，膜条被污染的可能性也就越大，从而使得检测膜条检测结果重复性差，也可能因为粘贴错误而致使检测结果的错误。而与定性检测相比，定量检测制定最佳临界值（cutoff），或者半定量检测，制定最佳稀释度，自身抗体更准确，更易自动化，而且更加反映与疾病的相关性，更有效地监测病情和疗效，预测疾病的发生和预后。定量检测某些自身抗体不仅可以更好地辅助诊断AID，而且可以更有效地反映病情、预测疾病的发生和预后、监测治疗效果。定量检测，则会较好解决这类问题，提高自身抗体对AID的诊断准确性。定量或半定量显示结果还有利于疾病前后或治疗前后进行比较，对疾病的监测或疗效的评估有重要价值。

自动化检测技术的发展，为精确、微量、高效检验提供了有力保障，从而为临床提供更加客观和准确的信息，有利于临床的判断。现在国外自身抗体检测中应用非常多的IFA法、ELISA法和CLIA法，已经分别实现不同程度的自动化。如美国INOVA公司的集成实验室，不仅可以实现单独仪器的全自动模式，更能使用QUANTA Link一款连接软件将所有自身抗体检测仪器进行组合，实现实验室的全自动化检测，这种集成实验室已在国内多家医院组装完成，大大提高了医院的检测质量和检测效率。

间接免疫荧光检测（IFA）检测自身抗体

IFA法被广泛应用于自身抗体的检测“金标准”方法，IFA法操作简单，检测成本不高，并且具有高度的敏感性和特异性。IFA基本原理是以组织培养细胞（最常用的是HEp-2细胞）于其上滴加患者血清，再加FITC标记的抗人IgG抗体于抗原片上，形成荧光素标记的抗人Ig复合物，在荧光显微镜下观察不同的荧光模型。不同的荧光模型提示不同自身免疫病，对诊断疾病有重要价值。在报告结果中需要说明荧光模型、阳性抗体的滴度，甚至加上本实验室所采用的底物情况。ANA滴度的情况可以间接说明患者体内自身抗体的多少，为临床提供半定量测定结果，是自身抗体的检测是一种非常好的筛查方法。不过，由于在判断核型方面，多数医院采用的是显微镜人工判读，如果要得到准确的结果，必须要有非常资深的医生才能保证所判读的结果达到非常高的准确度，否则容易出现核型的误判，导至严重的医疗后果，另外，长时间肉眼观看荧光核型，对人的眼睛有极大的伤害。美国INOVA公司不仅为在定量半定量检测方面提供优越的检测产品，同时也推出了替代人工判读的全自动荧光判读仪器，使判读结果的准确率达到99%以上。

酶联免疫吸附法（ELISA）检测自身抗体

ELISA法为自身抗体特异性的确定提供了敏感性高且较迅速的方法。使用纯化的靶抗原包被酶标反应板，加入待测血清后孵育，使用酶标的抗人免疫球蛋白抗体可以检测出与抗原结合的抗体，随后用合适的酶底物进行显色。尽管这种方法需要高度纯化的抗原，国内外大多数实验室已经使用ELISA法对IFA法阳性的血清进行常规的ANA特异性的判定，ELISA法应用越来越广泛。在确定ANA的方法中，ELISA法起着极为重要的作用，是自身抗体检测的经典方法之一。目前，美国INOVA公司在全自动化操作方面推出的QUANTA Lyser IFA/ELISA一体酶免分析系列仪器，经过国内外许多知名医疗机构的长时间使用验证，仪器性能优越，检测结果更加标准，且对临床检测的意义相对于定性检测方法，操作更简单，结果更标准化，定量检测对临床医生的诊断起到前所未有的参考价值。

化学发光检测技术（CLIA）检测自身抗体

CLIA是近10年来在国内外发展非常迅速的非放射性免疫分析，是继酶免疫分析ELISA、RIA、FIA三大标记技术之后发展的一种超高灵敏度的微量测定技术。将磁性微珠分离和极速化学发光法检测相结合，使其卓越的临床表现让免疫分析拥有更高的敏感性和更广的动态检测范围。集灵敏的化学发光分析和特异的抗原抗体免疫测定于一体的检测技术。特异性高、敏感性高、分离简便、快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化。然而，由于自身抗体检测研究与其他血清学抗体检测相比，起步较晚，化学发光技术一直未能成功在自身抗体检测中加以利用。近年来，美国INOVA公司一直致力于自身抗体检测的研究，除了致力于IFA、ELISA仪器自动化定量检测外，新上市的全自动化学发光免疫分析仪BIOFLASH，采用最前沿的血清学检测技术在自身抗体检测方面得以利用，是自身免疫抗体检测技术在定量检测领域的一次突破。BIOFLASH仪器不仅可以在传染病TORCH和术前项目有明显的综合优势，同时，在自免疾病如血管炎、抗磷脂酸综合征等方面同样表现出独一无二的检测功能。BIOFLASH是目前全球自免抗体化学发光技术检测涵盖检测项目最全面的发光仪器。在国内外推广期间，得到了前所未有的好评和反响。

总之，自身抗体定量检测时代已经到来，绝大多数自身抗体的检测将逐步采用定量或半定量检测模式。目前，在国内完全实现自动化、高通量、高准确性的定量检测项目仍较少，如何将最新检测技术应用于自身抗体的定量检测成为推动我国自身抗体检测技术革新的一个重要研究方向。随着检验技术的发展以及临床对自身抗体的要求和依赖性越来越高，自身抗体高通量、自动化、定量检测的技术必将成为未来的发展趋势。

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