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HLA-B27 检测各项方法详细解读

2019-5-12| 编辑: 小桔灯网| 查看: 209| 评论: 0|来源: 检验时间

摘要: 人类白细胞抗原(HLA)B27 是 HLA-B 位点上的一个重要的等位基因,早在 1973 年,相关研究就证实 HLA-B27 抗原的表达与强直性脊柱炎(AS)有高度的疾病相关性,而且这种相关是迄今己知的 HLA 与疾病的关联中是最强和 ...

人类白细胞抗原(HLA)B27 是 HLA-B 位点上的一个重要的等位基因,早在 1973 年,相关研究就证实 HLA-B27 抗原的表达与强直性脊柱炎(AS)有高度的疾病相关性,而且这种相关是迄今己知的 HLA 与疾病的关联中是最强和最典型的。


AS 患者一旦在临床上出现特征骶髂关节炎和脊柱改变,病程就已经进入中期,骶髂关节己经发生明确的局限性骨侵蚀、硬化,己经失去最佳的时机,而期 AS 发病隐匿症状多样,容易漏诊或误诊,通过 HLA-B27 检测对 AS 进行早期诊断和治疗有非常重要的意义,HLA-B27 检测也已经成为临床支持诊断也是判断疾病严重程度及预后的重要依据。


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另外,脊柱关节病(SpA)与 HLA-B27 的相关性从 70~90% 到 40~50% 不等,HLA-B27 检查也有助于这一类疾病的早期诊断。


如何选取灵敏度、特异度合适的检测方法,现阶段检测试剂是否有所改进,这些问题对 HLA-B27 检测至关重要,今天我们从检测方法角度了解一下。


 根据 HLA-B27 表达特点,用于临床检测的常见方法包括微量淋巴细胞毒法(MLCT Assay)、双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)、磁珠酶联免疫分析法(IMS-ELISA)、流式细胞仪分析法(FCM)、聚合酶链反应-序列特异性引物法(SSP- PCR)以及实时荧光 PCR(qPCR)法等,我们逐一分析各方法的优缺点:


▶ 微量淋巴细胞毒试验(MLCT Assay)

优点:无需特殊仪器,易于操作,一般实验室均可操作。

缺点:标本存放不能超过 8 h,感染可以使细胞膜表面 B27 分子数量及结构改变,影响结果,影响因素比较多,如细胞纯度、补体的活性和差异、抗体的纯度和效价、HLA 的高度多态性、细胞表面 B27 抗原分子表达数目及抗原交叉性、操作者的主观影响等,容易造成假阳性和假阴性的结果。


▶ 酶联免疫吸附试验(ELISA)

优点:其结果与 MLCT Assay 检测符合率为 99%,且不受感染因素影响,重复性好。

缺点:准确度相对偏低,容易误诊、漏诊。


▶ 磁珠酶联免疫分析法(IMS-ELISA)

优点:操作简便,操作时间短,需标本用量少,结果客观。

缺点:不适合大批量操作。


▶ 流式细胞仪分析法(FCM)

优点:全自动仪器检测,克服了人为误差,重复性高,结果判断准确,为目前最理想的方法;

缺点:仪器成本较高,适合医院批量检测应用。传统检测试剂与 HLA-B7 抗原有一定的交叉反应,可能出现假阳性。


▶ 聚合酶链反应-序列特异性引物法(SSP- PCR)

优点:标本不受时间限制,陈旧血、冷冻血也可用于 DNA 的提取,判断结果客观准确,特异性强,灵敏度高,稳定性好。

缺点:检测的是 HLA- B27 的基因型, 而血清学技术检测的是 HLA- B27 的表型,两者所反映情况并不一致,即携带 B27 基因并不等于细胞表面一定有 B27 抗原的表达,且操作较复杂,技术要求较高。


▶ 实时荧光 PCR 法(qPCR)

优点:直接检测 HLA-B27 抗原的编码基因,不会与 HLA-B7 产生交叉反应,能准确的作出判断。

缺点:与 SSP- PCR 的缺点一致,而且操作需要成本高,需要有专业的实验室及人员,目前未普及。


另外,这几种方法的的敏感性和特异性也不尽相同:


总体来说,流式细胞仪分析法(FCM)测定 HLA- B27 的表达,操作简便、灵敏度高、特异性强、可重复性高、结果稳定,更适合于临床应用


那么如何排除检查时出现假阳性,这成为进一步提高检测特异性的关键,贝克曼库尔新一代即用型 HLA-B27 检测试剂盒,改良了 B27 流式检测技术,采用双 B27 克隆,提高检出特异性,加入了 B7 抗原,排除交叉反应,试剂盒免洗,使用更方便,并且适用 FC500, Navios, DxFLEX, Calibur, Canto 系列等多种机型。每个机型都提供了决定值来判断阴阳性,使结果的判读更准确更方便


参考文献】:

1. Brown MA, Pile KD, Kennedy LG, et al. HLA class l associations of mkylosing spondylitis in the white population in the United Kingdom[J]. Ann Rheum Dis, 1996, 55(4): 268.

2. 黄翠珍, 蔡桂丰. HLA B27 检测在强直性脊柱炎临床诊断中的意义 [J]. 实用医学杂志, 2005, 21(4).

3. 王妍. 流式细胞仪检测 HLA-B27 抗原在强直性脊柱炎诊断中的应用效果 [J]. 白求恩医学杂志, 2018.

4. 黄河, 孙燕燕, 眭维国, et al. 流式细胞术和 SSP-PCR 法检测 HLA-B27 抗原的比较 [J]. 中国热带医学, 2007, 7(9):1662-1663.

5. 陈慧毅, 褚为靖, 张会英, et al. 实时荧光 PCR 法与流式细胞术两种方法检测 HLA-B27 的比较 [J]. 中国实验诊断学, 2012, 16(12):2251-2254.



编辑:杭璐

文章来源:贝克曼库尔特

题图来源:站酷海洛

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