 精彩演讲：如何设计体外诊断产品？ 李冬：均相酶免疫技术在小分子定量分析中的前景  本期的第一位演讲嘉宾为苏州博源医疗科技有限公司技术总监李冬。作为苏州博源医疗科技有限公司联合创始人之一，李冬老师具有丰富的免疫诊断试剂研发经验，尤其是在小分子检测领域。在本次演讲中，李冬老师介绍了均相酶免疫技术、小分子分析物在临床检验中的重要性以及均相酶免疫产品。 均相酶免疫技术是国际领先的临床检验新技术，集合了“抗原和抗体”及“酶和底物”两种系统优点于一身，主要用于小分子分析物的测定。李冬老师说，“均相酶免疫技术主要分为三部分，即均相、酶和免疫。”均相酶免疫检测试剂的研发难度高，周期长。他以甘胆酸试剂为例介绍了这种技术的难点，主要体现在小分子半抗原的合成、小分子免疫原、小分子抗体和“小分子-酶”偶联物四个方面。 小分子非常小，其直接不具备免疫原性，需经繁琐合成如经过高温、萃取、蒸馏、真空干燥、浓缩、色谱纯化和结构鉴定等，才能制备出小分子衍生物；对于小分子免疫原，主要是采用激活剂活化并与载体溶液进行交联反应，此过程需严格控制连接时间、温度、激活剂用量等多个环节，反应获取物经透析纯化，最后才能得到具有免疫原性的甘胆酸免疫原；小分子抗体的生产需经过免疫、提取、纯化和验证多个步骤，小分子抗体既要能与待测小分子产生特异性反应，同时需不能和其它类似物产生非特异性反应；“小分子-酶”偶联过程中要保持无水和低温，同时对于激活剂的用量也需进行平衡，以保证酶偶联物的活性和小分子连接的数量的平衡。 对于均相酶免疫技术应用现状，李冬老师表示，“目前该技术在国外已广泛应用，而在国内暂未普及。”对于未来，他展望到，“均相酶免疫技术具有灵敏度高、特异性强、准确性好、操作简单等特点，同时可实现自动化检测。随着基因工程、酶工程、化学合成、特异性抗体等技术的发展，均相酶免疫技术在临床检验方面将得到进一步推广，有广阔前景。” 李自双：流式细胞仪的工作原理及临床应用  本期的第二位演讲嘉宾是中生（苏州）医疗仪器有限公司研发总监李自双。李自双老师拥有20年的产品研发经验，在本次主题演讲中，他主要给大家介绍了流式细胞仪的工作原理及临床应用，同时还介绍了他们对流式细胞仪的研发经验。 李自双老师从流式细胞仪的工作原理讲起，详细介绍了流式细胞仪各个系统如何工作。流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。流式细胞仪主要由四部分组成：流动室和液流系统、激光源和光学系统、光电管和检测系统、计算机和分析系统。 对于细胞仪的临床应用，李自双老师表示市场前景很大。流式细胞仪最大的贡献在于促进免疫学基础研究和临床诊断，目前已被广泛用于细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、病理学、遗传学和临床检验等多学科领域的研究和临床研究。 “目前市场上竞争对手研发的流式细胞仪的定价比较高，如何突破这个瓶颈，是我们目前所进行的项目。”李自双老师对产品改进、产品开发及新产品引进颇有经验，因此对于流式细胞仪的研发也有自己独到的见解。在本次活动中，他还分享了自己在医疗器械上的研发心得。 张伟：血液核酸检测技术和诊断产品开发  第三位演讲嘉宾为凯杰（苏州）转化医学研究有限公司业务总监张伟。张伟老师主要介绍了液体活检新技术，围绕循环肿瘤DNA检测、外泌体RNA检测以及循环肿瘤细胞RNA检测展开。 血浆样本基因突变检测常用的平台有两种——qPCR以及二代测序。张伟老师介绍了针对cfDNA的PCR技术以及凯杰在该领域中的产品是如何开发，这些产品又是如何解决其他的PCR如巢式PCR等在研发中面临的问题。对于NGS平台，张伟老师对样本制备、靶向富集、文库构建、下一代测序、数据分析以及信息解读等各个环节进行了详细介绍，并分享了凯杰在NGS平台上的产品开发经验。 紧接着，他介绍了如何进行外泌体RNA检测。提取外泌体是检测的第一步，那么如何从血浆、血清及细胞培养上清中纯化外泌体及其他细胞外泌体？张伟老师给大家分享了他们在这个过程中的一些经验和成果，介绍了一种能在25分钟内完成外泌体小体纯化的技术。外泌体提取和纯化之后，要进行的是外泌体RNA检测，“外泌体的提取问题解决之后，剩下的就比较简单了，因为后面的RNA检测技术都比较成熟”，张伟老师说。 对于循环肿瘤细胞的RNA检测，张伟博士说， “循环细胞的RNA检测从科研到临床确实有点距离，因为CTC的纯化需要新鲜制备。”对于该领域的产品开发，他介绍了如何进行血样采集、CTC富集、细胞裂解、多重RT-PCR以及结果的读取。 圆桌讨论  主题演讲之后，迎来的是圆桌讨论环节，主要回答了线上及线下会员提出的问题，与会员们进行“零距离”的交流活动。在本环节中，有的会员对投资感兴趣，有的对产品的研发周期感兴趣，还有的对技术的发展感兴趣。三位嘉宾就这些问题进行了详细解答。下面小编就挑几个话题来跟大家分享。 我们知道，对于体外诊断，仪器和试剂是一个系统，那么目前国内在仪器设备的研发上有哪些问题？李自双老师对此进行了解释，“目前很多公司对体外诊断试剂的研发做得比较好，国产试剂和进口试剂都可以有得一拼，但是作为和试剂配套的仪器来说，与国外相比，国内还有一段很大的距离。就目前而言，国内所有的三甲医院以及大部分的大型医院基本上都采用进口仪器，这主要是由仪器的研发和发展所制约。仪器研发不像试剂研发，它涉及了机械学、电子学、软件学、光学等领域的知识。仪器研发的每个环节都需要很强的专业能力，其中任何一个环节薄弱，整个研发过程都将会很难进行，因此只有所有环节都尽可能完美，研发出来的仪器才可能是好的。另外，仪器研发的成本也比较大，但目前有一个比较好的趋势是科研院所和企业合作进行开发，这对人员稳定上有了一定的保障。” 液态活检是近年来比较火热的领域，网友对该领域也比较感兴趣。有网友提出，血检ctDNA检测试剂盒从科研用途到临床用途的转变，技术和政策层面上有何障碍？对此，张伟老师解答说，“对于ctDNA检测的技术，我想最主要的是如何提取ctDNA以及构建NGS文库。举个例子来说，利用二代测序进行ctDNA检测，从科研到临床，而最主要的障碍在于数据的解读，目前国际以及国内都有企业在推动这件事情。在政策上，诊断技术必须有明确临床意义才能变成产品，这是基本的要求。” 另外，现场会员对均相酶免疫技术的一些数据如临床验证的准确性比较感兴趣，对此李冬老师说，“均相酶免疫技术是一种高通量的分析技术，每小时可以进行几千个样本的分析，在使用上比较方便，另外在成本上也有一定优势，因为不需要买额外的设备。对于该技术的临床验证，我们是进行了很大的临床验证，我们也通过与雅培等企业进行详细的比对。” 那么哪些体外诊断产品是比较受市场所青睐的？李冬老师说，“操作比较简单且比较成熟的产品最受欢迎。新产品在推广上可能需要一定的时间且有一定的难度，老产品经过优化后，可能更容易满足临床的需求。” |
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