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为什么抗原抗体需要避免反复冻融?

2022-9-23 16:15| 编辑: 归去来兮| 查看: 723| 评论: 1|来源: 维润赛润资讯 | 作者:SERION原料事业部

摘要: 抗原或抗体的保存条件非常重要,只要条件得当,一般都可以保存几个月到几年。


抗原或抗体的保存条件非常重要,只要条件得当,一般都可以保存几个月到几年。对于多数的抗原或者抗体而言,分装保存在-20℃或者-80℃是最佳的方法,且保存过程中应注意避免反复冻融。



为什么需要避免反复冻融?

肯尼亚医学研究所的Carolyne M. Kifude等在测试抗原rPfHRP2 的稳定性中发现,在第5次反复冻融后,抗原的回收率开始迅速下降。有资料显示,反复冻融的过程中易产生冰晶,而冰晶的形成会破坏蛋白质结构,从而使蛋白失效。



那么,如何防止冰晶的形成?

通常需要添加甘油和乙二醇等冷冻保护剂来抑制水分子之间的氢键结合,降低水溶液的冰点,从而防止冰晶的形成。



冷冻保护剂最佳的浓度是多少?

保护剂的实际冰点取决于保护剂的特性和浓度(见表 1)。当储存温度低于冷冻保护剂抗体溶液的冰点时,溶液会凝固。然而,通常会发生玻璃化(快速冷却,低温时形成的一种高黏度的介于液态和固态之间、非晶体、透明的玻璃态),而不是冰晶形成,在玻璃化过程中,溶液固化而不形成晶体,因此抗原或抗体的结构完整性得以保持。


为提高稳定性,可添加甘油或乙二醇至终浓度为 50%,然后将抗原或抗体分装储存在 -20°C,防止冰晶的形成,避免抗体变性。由于甘油可能被微生物污染,因此在用于抗体储存时使用无菌甘油制剂至关重要。


表1:不同浓度(%)冷冻保护剂的冰点(℃)
浓度(%)
甘油(glycerol)
乙二醇(ethyleneglycol)
10
-2
-4
20-5
-7
30
-10
-15
40-16-23
50-22
-34
60-34
-48
70-38
-51
80
-19
-45
90
-2
-29
100
17
-12


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引用 ll8848 2022-9-26 10:52
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