Scientific reports丨基于干血点标本的HIV和HCV检测

人类免疫缺陷病毒（HIV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染仍然是全球重要的公共卫生问题。根据联合国艾滋病毒/艾滋病联合规划署（UNAIDS）和世界卫生组织（WHO）的估计，2020年约有150万人新感染艾滋病毒和丙型肝炎病毒。重点人群，尤其是在注射药物的人群中HIV和HCV合并感染的流行率也令人担忧。在高效抗逆转录病毒疗法（ART）和直接作用抗病毒药物（DAA）的帮助下，已制定了2030年消除艾滋病毒和丙型肝炎病毒（HIV和HCV）作为公共卫生威胁的宏伟目标。UNAIDS 95-95-95目标规定，95%的艾滋病毒感染者（PLWH）应了解其艾滋病毒状况，95%了解其状况的人应接受治疗，95%接受艾滋病毒治疗的人应受到病毒抑制。同样，世界卫生组织建议，目标是在符合条件的人群中治疗80%的丙型肝炎病毒感染，将丙型肝炎病毒感染的新发病率降低90%，并将肝脏相关死亡率降低65%。这些消除目标的进展可以通过行为和生物血清学监测系统进行监测，但它们需要准确的血清学检测来检测艾滋病毒和丙型肝炎病毒抗体。血清学检测还应与干血点（DBS）样本兼容，以减少生物样本采集的结构和地理障碍，促进监测的实施。

VIDAS HIV Duo-Quick是第四代酶联荧光分析（ELFA），能够检测p24抗原和HIV抗体。VIDAS anti-HCV是第三代ELFA，利用NS3、NS4A和NS4B抗原检测抗HCV抗体。这两种分析均作为包含所有必要试剂的ready-to-use试纸出售，VIDAS台式免疫分析仪自动执行方案（即清洗、培养和检测），从而最大限度地减少操作员错误。与手动96孔板血清学分析相比，VIDAS系统操作更简单，成本显著低于其他商业免疫分析仪，如Abbott Alinity或Bio-Rad BioPlex 2200。VIDAS HIV Duo Quick和anti-HCV在血清和血浆中表现出色，但目前缺乏DBS的表现数据，尤其是在血清监测方面。

近日，来自加拿大的研究团队在杂志Scientific reports上发表了一篇题为“Evaluation of the bioMérieux VIDAS HIV Duo Quick and Anti-HCV assays for dried blood spot based serosurveillance”的文章。在文章中，研究团队评估了VIDAS-HIV Duo Quick和anti-HCV检测在DBS中分别检测HIV和HCV抗体的性能，以进行血清监测。分析是根据在乌克兰收集的DBS样本（n=725）子集进行评估。使用Avioq HIV-1 Microelisa System或Ortho HCV v3.0 ELISA Test System作为参考试验，评估敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。

图片来源：Scientific reports

选择DBS样本的随机子集（n=725），用VIDAS HIV Duo Quick和anti-HCV分析进行回顾性测试，以评估其性能。

使用Avioq HIV-1 Microelisa System或Ortho HCV v3.0 ELISA Test System作为参考试验，评估敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。这两种参考测试都是加拿大公共卫生局行为和生物监测系统的核心，该系统使用DBS样本监测加拿大关键人群中的艾滋病毒和丙型肝炎流行率。

在该子集中，Avioq HIV-1 Microelisa System和Ortho v3.0 ELISA Test System在DBS样本中分别为7.6%（55/725）和27.4%（199/725）。在HIV阳性和HIV阴性的DBS样本中，VIDAS HIV Duo Quick阳性率为96.4%（53/55），阴性率为82.7%（554/670），敏感性为96.4%（95% CI 87.7%，99.4%），特异性为82.7%（95% CI 79.6%，85.4%），PPV为31.4%（95% CI 24.8%，38.7%），NPV为99.6%（95% CI 98.7%，99.9%）。VIDAS HIV Duo Quick与基于kappa系数的Avioq HIV-1 Microelisa System的一致性为moderate （kappa=0.405 [95% CI 0.326，0.485]）。

VIDAS HIV Duo Quick和Anti-HCV检测DBS样本中HIV和HCV抗体的性能统计图片来源：Scientific reports

在HCV阳性和HCV阴性的DBS样本中，VIDAS抗HCV阳性率为87.9%（175/199），阴性率为98.5%（518/526），其敏感性分别为95.6%（95% CI 91.6%，97.8%），特异性为95.6%（95% CI 93.5%，97.0%），PPV为95.6%（95% CI 91.6%，97.8%），NPV为95.6%（95% CI 93.5%，97.0%）。VIDAS anti-HCV与 Ortho HCV v3.0 ELISA Test System检测结果几乎完全一致（kappa=0.886 [95% CI 0.848，0.925]）。

VIDAS HIV Duo Quick可以充分区分HIV阳性和HIV阴性DBS。此外，ROC曲线分析表明，可以通过调整制造商提供的cutoff值来提高性能。调整测试值显著提高了特异性（95.7% [95% CI 93.9%，97.0%] VS. 82.7%[95% CI 79.6%，85.4%]），并与Avioq HIV-1 Microelisa System一致性提高（0.741[95% CI 0.656，0.826] VS. 0.405[95% CI 0.326，0.485]）。

VIDAS anti-HCV也可以充分区分HCV阳性和HCV阴性的DBS，然而，调整测试值cutoff对性能没有显著影响。

DBS样本的VIDAS HIV Duo Quick和anti-HCV性能。

图片来源：Scientific reports

血清监测将在当地和国际上发挥核心作用，监测在2030年消除艾滋病毒和丙型肝炎目标方面取得的进展。虽然血清和血浆通常是血清学监测的首选生物样本，但由于缺乏基础设施、缺乏训练有素的医务人员以及不方便进入采集点，采集血液并不总是方便或可能的。血清学检测也应可以使用DBS样本，这可能导至更具代表性的抽样和疾病流行率的准确估计。

虽然研究结果表明，由于PPV为64.2%（95% CI 53.3%，73.8%），VIDAS Duo-Quick在低发病率环境中的使用可能有限，但优化DBS样本的洗脱方案可能有助于更好的分析性能。未来的工作将包括使用由高度特征化的参考血清/血浆样本设计的DBS样本改进洗脱方案。

相比之下，VIDAS anti-HCV在实验室的表现更好。尽管如此，但改进DBS洗脱方案对于提高性能和在低发病率环境下使用VIDAS anti-HCV可能是必要的。