技术｜如何解决侧向层析检测的血液分离

许多医护人员使用全血侧向层析检测来快速简单地检查生物标志物的存在。常见的例子包括在没有实验室的地方进行传染病的分子测试，以及在家里或救护车上使用的心脏标志物的便携式测试包。

当你需要检测细胞外生物标志物时，红细胞和白细胞都会干扰侧向层析检测。红细胞具有强烈的颜色，在氧化还原反应中很活跃，影响结果和读数。白细胞含有DNA，这也会影响快速检测测定的灵敏度。

有效地分离血浆和血细胞可以提高诊断测试的灵敏度和可靠性，这是开发可靠检测方法的关键。然而，有几个常见的问题可能会阻碍有效的血液分离。请阅读以下关于这些挑战和每个挑战的潜在补救措施的详细信息：

当红细胞破裂并将其内容物，其中最重要的是血红蛋白，释放到血浆中时就会发生溶血。当这种情况发生时，血浆会变成红色，使得可靠地判断读数更加困难。

发生溶血的一个常见原因是使用了旧样本或因处理而对细胞造成压力。当新鲜血液被应用到垫子（也被称为血液分离膜）上时，溶血的风险就会降低，处理步骤也会减少。

使用不合适的玻璃纤维类型也会导至溶血。小直径的玻璃纤维可以对细胞膜施加高应力，有效地将红细胞切开。如果你认为纤维直径可能导至溶血，可以尝试使用直径较大的纤维的分离膜，以减少压力和损坏细胞膜的风险。

过滤过程中使用的洗涤缓冲剂类型也会影响溶血的风险。洗涤缓冲液含有表面活性剂和盐，前者有可能破坏细胞膜，后者在浓度不理想的情况下会导至细胞膨胀或收缩。带有温和表面活性剂的等渗缓冲液将最大限度地减少洗涤缓冲液损害细胞的风险。

红细胞突破是与溶血相似但独立的影响；两者都会导至血浆在分离后保持红色。导至细胞突破的常见原因包括分离膜边缘的泄漏和使用超过分离膜容量的血量。

如果您的初步测试显示有细胞突破，在某些情况下，简单的解决办法是减少样品量或增加血液分离垫的体积。沿着分离垫的边缘有足够的压力，并确保细胞不能在边缘漏出，这也将最大限度地减少突破。

分离膜的玻璃纤维有时会在其表面结合分析物。玻璃的疏水性质导至一些蛋白质和核酸通过疏水作用粘在纤维上。

避免粘性纤维的一个方法是用一种聚合物涂抹它们，使基质更加亲水。聚乙烯醇（PVA）是一种常见的亲水涂层，PVA涂层的过滤材料，如Fusion5，提供高度亲水的表面，不与大多数分析物发生作用。

分离膜基质内的不均匀性会导至样品的不均匀分离。液体在垫子的某些部分比其他部分流得快，会导至不同的测试运行时间和结果的不一致。

这种不均匀的流动可能是由测试的设计和构造或检测方案中的细微差别造成的。确保选择高度均匀的过滤材料，并对样品应用的方法和位置提供明确的指导，可以帮助实现一致的血液分离。

有一系列适合于血液分离的过滤材料。最适合您的应用的分离膜类型往往取决于预期样品所需的容量--也就是厚度。

用于不同容量的深度分离膜材料的例子包括：

➤  LF1，用于10至15 μL的容量；

➤  MF1和Fusion 5，适用于15至50 μL的容量；

➤  VF2和GF/DVA，适用于大于50 μL的体积。