立即注册找回密码

QQ登录

只需一步,快速开始

微信登录

微信扫一扫,快速登录

小桔灯网

小桔灯网 门户 资讯中心 杂侃天下 查看内容

PCR实验室项目开展索引大全(建议收藏)

2020-9-16| 编辑: 归去来兮| 查看: 244| 评论: 0|来源: 检验星空

摘要: PCR实验室又叫基因扩增实验室,实时荧光定量PCR技术是DNA定量技术的一次飞跃,是用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别。 ...

PCR实验室又叫基因扩增实验室,实时荧光定量PCR技术是DNA定量技术的一次飞跃,是用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别。而实时荧光定量PCR则是实现该项技术的载体。PCR实验常用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病,通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。PCR检测方法具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。



在国家政策和疫情发展的推动下,各地区各级医院都开始或者准备建立独立合规的PCR实验室,都已具备核酸检测能力已经成为各医疗机构。但由于各地区疫情的差异化使得长期低风险地区的一些核酸实验室除了具备应急功能之外几乎处于停滞状态。此类情况也是各级医院领导在建立实验室最担心的问题,投入了资金和精力但又不能给医院带来创收。


PCR实验室其实功能极其强大,定性分析和定量检测是它最大的两个应用方向,那除了新冠核酸检测,我们“万能”的PCR实验室还能做些什么呢?接下来就给大家展示几个具体应用方向的项目示例,也希望通过这些示例可以给各级医疗系统提供一些项目开展的思路和方向。


(一)病原体测定

PCR技术的问世使病原体检测能够快速、方便地进行。由于PCR技术假阳性率太高,只要有微量病原体存在就可得到阳性结果,这并不能作为诊断依据,只有当一定数量的病原体存在时才有临床意义。因此,对模板准确定量显得特别重要,应用荧光技术PCR就能够快速、准确地得到结果。对于解决免疫学检测的“窗口期”问题,判断疾病是否处于隐性或亚临床状态,以及抗体检测不能判定是现症感染还是既往感染时,均可利用PCR进行确定。

示例:新型冠状病毒核酸检测。
方法学:荧光PCR法。
用途:用于体外定性检测新型冠状病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要进行新型冠状病毒感染诊断或鉴别。
检测基因:新型冠状病毒(2019-nCoV)ORFlab和N基因、E基因。
标本类型:上呼吸道标本:咽拭子、鼻拭子;下呼吸道标本:呼吸道抽取物、肺泡灌洗液样本、肺组织活检标本。
检测流程:
(1)核酸检测前的生物安全防护(工作人员个人三级防护的穿戴)→(2)样本的灭活(56℃灭活30分钟)→(3)样本的核酸提取(手工、核酸提取仪)→(4)PCR体系的配制和模板加样→(5)上机检测及结果分析→(6)检测后的消毒。
其他病原体检测:HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族链球菌。
适合开展的医院和科室:儿童医院、妇幼、儿检所、第三方、各种级别的有需求的医院。

(二)遗传病检测

基因突变和拷贝数变异是遗传病发生的主要遗传学基础,也是遗传病检测的主要靶标。遗传病的复杂性伴随着基因突变数目多、类型广;基因拷贝数变异不仅表现为缺失和复制,而且缺失位置、大小以及复制倍数都呈现多样性。遗传变异的复杂性为遗传病的临床检测提出了技术挑战。实时PCR技术是我们最近发展起来新一代实时PCR技术,利用荧光标记或熔点分析,可以在单个反应管内检测多个靶标。

示例:人Y染色体AZF区微缺失检测。
方法学:荧光PCR法。
用途:本产品用于定性检测男性全血样本中 Y 染色体无精子症因子。(azoospermia factor,AZF)区域是否存在缺失,具体检测缺失位点为:AZFa:sY84、sY86;AZFb:sY127、sY134;AZFc:sY254、sY255;AZFd:sY145、sY152。
临床研究表明,Y 染色体 AZF 区(AZFa, AZFb, AZFc, AZFd)不同程度的缺失可导至男性的少精症、无精症或精子畸形等症状,从而导至男性不育。本试剂盒可辅助诊断确诊不孕不育患者的病因分析,检测结果仅供临床参考,不能单独用做确诊或排除病例等临床诊断的依据。
标本类型:全血。
检测流程:
(1)样本处理及 DNA 提取(在标本制备区完成)→(2)样本处理及 DNA 提取(在标本制备区完成)→(3)加样(在标本制备区完成)→(4)PCR 扩增(在扩增区完成)→(5)结果分析与判定。
其他同类项目:地贫、耳聋、苯丙酮尿症(PKU)、蚕豆病(G6PD)、脊髓型肌萎缩(SMA)、进行性肌营养不良(DMD)、强直性脊柱炎(HLA)、血友病。
适合开展的医院和科室:妇幼、第三方、各种级别的有需求的医院。

(三)个性化用药

药理学和药物基因组学的发展,阐明了药物代谢和效应个体差异的遗传本质,药物异常反应主要是因为药物代谢酶基因变异而导至酶活性异常,进而导至服药后体内药物未能被正常代谢、消除而排出体外,使得体内药物浓度过高或过低,达不到理想的治疗效果。这种异常药物反应,可通过检测与患者所服用药物相关的遗传基因,调整药物剂量或寻找替代药物,最大程度地制定出更合理、有效、经济的药物治疗方案。

示例:心血管个体化用药指导检测:CYP2C19基因突变检测试剂盒、CYP2C9基因突变检测试剂盒、ALDH2基因突变检测试剂盒、MTHFR基因突变检测试剂盒。
方法学:荧光PCR法。
用途:氯吡格雷、华法林、硝酸甘油及叶酸均为心血管临床上常见的药物,心血管用药指导分子生物学检测,明确基因分型,药学部临床药师根据检测结果,并综合考虑患者自身因素、临床诊断以及联合用药等相关信息,为临床出具个体化用药建议。
标本类型:全血(本试剂盒无需提取DNA,加样直接PCR)。
检测流程:
(1)配制反应体系(在样本准备区完成)→(2)直接加入全血(在标本制备区完成)→(3)PCR 扩增(在扩增区完成)→(4)结果分析与判定。
其他同类项目:他汀类用药(ApoE)、β受体阻滞剂(ADRB1)、儿童安全用药、肿瘤靶向化疗个性化用药(EGFR、kRAS)类。
适合开展的医院和科室:心血管医院、肿瘤医院、第三方、各种级别的有需求的医院。

(四)肿瘤研究

肿瘤是危害人类健康的一种疾病,它的恶性程度与预后判断主要依靠是否有转移和病理切片分期。随着分子生物学的迅猛发展,肿瘤研究领域的大量研究成果显示,肿瘤的发生、发展、治疗和预后与肿瘤细胞内部基因和肿瘤相关病毒有关。很多原癌基因和抑癌基因的表达情况的检测都可揭示了癌变的可能性,而PCR方法学可以解决此类问题,此外,PCR方法用于体外定性检测人外周血血浆中septin9基因甲基化,用于各种肿瘤的临床辅助诊断。

标本类型:全血/组织。
检测流程:
(1)PCR反应体系构建(在试剂准备区完成)(2)样本处理及 DNA 提取(在标本制备区完成)→(3)亚硫酸盐转化(在标本制备区完成)→(4)PCR 扩增(在扩增区完成)→(5)结果分析与判定。
其他同类项目:SHOX2基因、RASSF1A基因、SDC2基因甲基化、MGMT基因甲基化、RNF180、her2。
适合开展的医院和科室:肿瘤医院、第三方、各种级别的有需求的医院。

-END-

声明:
1、凡本网注明“来源:小桔灯网”的所有作品,均为本网合法拥有版权或有权使用的作品,转载需联系授权。
2、凡本网注明“来源:XXX(非小桔灯网)”的作品,均转载自其它媒体,转载目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责。其版权归原作者所有,如有侵权请联系删除。
3、所有再转载者需自行获得原作者授权并注明来源。

鲜花

握手

雷人

路过

鸡蛋

最新评论

关闭

官方推荐 上一条 /3 下一条

客服中心 搜索 官方QQ群 洽谈合作
返回顶部