公司网址：www.lewinbio.com 在药物研发与临床试验中，如何在极低样本量中捕捉稀有、低丰度的生物标志物，一直是检测技术的瓶颈。最近，Genentech团队在Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis发表了一项最新成果：他们优化并验证了一种免疫-PCR (iPCR)超灵敏检测方法，可用于检测人体血清、血浆及眼房水中的活性（还原型）IL-33。
IL-33的临床意义 IL-33是一种重要的细胞因子，在炎症、感染以及眼科疾病（如AMD，年龄相关性黄斑变性）中发挥关键作用。它通过与细胞表面受体ST2和IL-1结合，诱导Th2细胞产生2型细胞因子，触发促炎反应。临床研究中，活性IL-33（还原型）的浓度极低（常低于pg/mL），且样本中可能存在可溶性ST2（sST2）干扰检测。尤其在眼部研究中，房水样本量极少（通常需要高稀释度检测），传统ELISA灵敏度有限，难以在眼房水等稀有样本中检测。 此前团队开发的ELISA方法虽能耐受sST2干扰，但检测下限（LLOQ）仅为8.2pg/mL，无法检出房水中的IL-33—— 这正是研发iPCR方法的核心动因。 技术突破： 免疫 PCR（iPCR）突破检测极限 iPCR的核心优势在于 “强强联合”：结合抗体的特异性与PCR的信号放大能力，将传统ELISA中 “酶促光学信号” 替换为 “DNA扩增信号”，灵敏度实现质的飞跃。 本次研究对初代iPCR方法（用于基础研究）进行了9项关键优化，使其符合临床生物标志物检测的严格要求，核心改进及效果如下：
临床级验证： iPCR方法的可靠性 研究团队依据《Crystal City V/VI》等临床生物标志物验证指南，从5个关键维度验证了方法的可靠性（数据基于7次独立实验）： 准确度与精密度 · 标准品的批间变异系数（%CV）为10%-22%，质控样品（高 / 中 / 低浓度+内源性对照）的%CV为12%-19%； · 总误差（%RE+%CV）均在可接受范围内，无明显偏差。
检测下限（LLOQ）与上限（ULOQ） · 稀释校正后，LLOQ为977fg/mL（≈1pg/mL），ULOQ为1,000,000fg/mL（1ng/mL）； · 可精准检测 “亚皮克 / 毫升” 级别的还原型IL-33，比初代ELISA灵敏8倍以上。 样本适用性 · 血清/血浆样本：IL-33检出率达97%-100%（覆盖健康人及疾病患者）； · 房水样本：仅1/20人房水、0/5新西兰兔房水检出IL-33（提示房水中IL-33浓度极低，或易氧化）。 平行性与重复性 · 平行性：10份疾病患者血清（1例AMD、4例哮喘、5例类风湿关节炎）在1:4和1:8稀释度下，90%样本的%CV≤30%，证明内源性IL-33与重组标准品的检测响应一致； · 重复性：8份慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血浆样本，由2名分析师在2天内检测，所有样本的%RE≤30%，批间稳定性优异。
临床应用：能为药物研发带来什么？ 直接支持眼部疾病研究 团队用该方法检测了一项1期临床研究（NCT04615325，评估抗IL-33 Fab治疗AMD的安全性 / 药代动力学）的房水样本，虽未检出IL-33，但为后续 “低剂量药物疗效监测” 提供了工具 —— 毕竟 “能精准检测到‘极低浓度’” 本身就是临床需求。 广泛适用性 该方法的设计思路可推广至其他低浓度细胞因子检测，尤其适合： · 样本量极少的基质（如脑脊液、房水）； · 低丰度炎症因子（如IL-4、IL-13等）； · 需要超灵敏检测的临床研究（如早期疾病诊断、药物剂量优化）。 原文链接：https://doi.org/10.1016/j.jpba.2025.117095
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