感染性疾病诊疗新帮手：靶向二代测序（tNGS）怎么用？看完这篇就懂

感染性疾病诊疗的关键，在于尽早、快速且准确地找到病原体。今天要给大家介绍的靶向二代测序（tNGS），凭借其独特优势，在临床中受到越来越多的关注。不过，它的规范使用还有不少讲究，下面就用通俗易懂的方式聊聊相关知识。

什么是tNGS？和mNGS有啥不一样？

tNGS和宏基因组二代测序（mNGS）都是通过高通量测序来辅助诊断病原微生物的技术，但它们差别不小。

mNGS是“无偏倚”检测，能查成千上万种微生物，包括细菌、真菌、病毒、寄生虫等，不过容易受人体自身背景干扰，检测成本也高，周期大概24 - 38小时。

tNGS则是“有针对性”的，先捕获或富集特定病原体的核酸再测序。它能同时检测上百种病原体，成本比mNGS低，检测周期更短，约14 - 26小时，受人体自身背景影响小，灵敏度也更高，但检测范围相对窄一些，没法检测罕见或新发病原体。

tNGS适用于哪些感染情况？

1. 血流感染：像全身性感染，病原体随血液扩散，病情危重。怀疑血流感染时，建议在使用抗菌药物前、疗效差时、停用24小时后或下次用药前，同时做tNGS和血培养。不过要注意，tNGS特异性稍低，结果得结合临床看，排除污染等干扰。

2. 呼吸系统感染：病原体复杂，病毒感染还容易继发细菌、真菌感染，传统检测有局限。要是常规用药效果不好，3天内病原学检测阴性，或者是重症感染，推荐做tNGS。还有像怀疑螺旋体、军团菌等特殊病原体感染，且病情重、治疗效果不好的，也建议用tNGS。但如果怀疑是罕见或新发病原体，就得用mNGS了，而且样本质量不好的话，两种都不建议做。

3. 泌尿系统感染：首选尿培养。如果尿培养阴性，或者没法明确病原体，有特殊病原体感染史或暴露因素的，可先考虑靶向PCR；没有怀疑方向的，就做尿tNGS。

4. 中枢神经系统感染：病情危急，有发热、头痛、意识障碍等症状。要是3天内没明确病原体，经验性治疗又没效果，推荐做脑脊液tNGS。怀疑隐球菌、结核分枝杆菌等特殊病原体感染，且病情发展快或拖延的，也建议做。

5. 局灶性感染：像眼部、骨关节、皮肤软组织等局部感染，有红、肿、热、痛等症状。如果3天内常规检测阴性，经验性用药效果差，或者怀疑特定特殊病原体感染且病情特殊的，推荐做tNGS。

6. 其他感染：没法明确感染源，病情持续进展或治疗无效的，推荐做tNGS。但复杂感染、多重感染要找主要病原体，急危重症要明确感染源的，建议首选mNGS。

做tNGS，样本采集有啥讲究？

要根据患者情况，选择和病灶最相关的部位采样。要是采样困难，没优质样本，病情又不耐受有创操作，或者没明确感染部位，也能选血液样本，但准确性和阳性率可能不如病灶部位样本。

采样时一定要严格无菌操作，尽量在使用抗微生物药物之前，或者下一次用药前采集，而且要及时送检。

实验室检测和结果解读要注意什么？

1. 样本前处理和核酸提取：不同样本处理方式不同，比如血液样本，要根据检测技术路线选血浆或血细胞。提取核酸的质量很关键，要做好质量控制，浓度不够可能影响结果，必要时重新提取或采样。

2. 文库构建和测序：文库构建是核心，要选合适的路线，做好质量控制。测序数据量有要求，基于探针捕获的tNGS建议100万序列以上，基于超多重PCR的建议10万序列以上。

3. 结果报告和解读：实验室要确定阳性阈值，低于阈值的不报告，达到或高于阈值的，排除干扰后报告阳性，有疑问的要复测或用其他方法验证。报告里会区分致病性、条件致病性和定植/微生态微生物，医生会结合患者情况综合判断。要是检出耐药基因，也会一并报告，帮助医生选药。

质量控制有哪些要求？

实验室人员要各司其职，“湿实验”操作人员得有分子生物学检验技能，“干实验”人员要懂生物信息学，报告解读团队要有临床相关背景，而且都要参加培训。

从检验前的知情同意、样本申请，到检验中的流程规范，再到检验后的报告审核、样本保存等，都有相应的质量控制要求，确保检测结果可靠。

tNGS为感染性疾病诊疗提供了有力帮助，但也有一定局限性，比如检测范围还没完全标准化等。不过随着技术发展，它会在精准诊疗中发挥更大作用。