社论：参考物质如何有用？

临床实验室检测已经发展到由诊断系统制造商为大多数常用方法提供仪器、试剂和校准品的阶段。参考方法和参考物质作为分析系统校准准确度的基准，由美国国家组织进行维护和认证，包括临床实验室标准研究院 (CLSI，原NCCLS)、美国国家标准和技术研究院 (NIST)、和美国病理学会 (CAP)，以及世界卫生组织 (WHO) 和欧洲共同体的参考局 (BCR) 等国际组织。参考方法和物质的汇编可从CLSI获得。在许多情况下，一级参考物质仅用于参考方法校准，不适合直接用于常规临床实验室方法。一级参考物质和方法提供了一个稳定的准确度系统，使得制造商能够将其转换成常规临床实验室检测产品。准确度转换成现场方法，使用了产生的二级参考物质，以符合检测系统制造商方法的独特校准需求。

  用于不同分析方法和检测系统的通用型人血清参考物质可从多个来源获取。在某些情况下，参考物质 (如NIST SRM 909) 会附带提供通过无干扰或参考方法准确测定的分析物含量。由用户负责确定，该物质是否适用于某个特定的临床方法。

  在大多数情况下，供临床实验室使用的参考物质和校准品是以生物材料制备的，通常是人血清，会采用各种技术，以确保其对预期检测系统的适用性。分析物含量在浓度上需要适合方法校准或校准验证，并且该物质需要储存数年而不发生降解，因此需要对来自日常临床标本的天然基质进行修改。常见的改变是增加分析物浓度和添加稳定剂，并通过冷冻干燥提供长期稳定性。这些物质的厂商使用了最先进的技术来确保产品均匀和稳定。但遗憾的是，加工处理过程总有问题，且每一批生物材料都是独特的。任何一个成分都可能无意中引入污染，影响分析物稳定性。统计抽样用于检查均匀性和加速稳定性试验，具有很高的预示功能，但最终依然会有某个分瓶存在缺陷的可能。

  参考物质的潜在局限性，是产品瓶间的均一性和分析物稳定性。分瓶中各个分析物的靶值不确定性，来自赋值技术的影响、瓶间不精密度以及储存与运输期间分析物的不稳定性。用户在参考物质的前处理过程中，如冻融、复溶和混匀等步骤都可能引入误差。De等报告，遇到两个浓度水平的NIST SRM 909a均有缺陷的情况。该缺陷导至了单次运输中有几套参考物质，个别瓶中葡萄糖、尿酸、和胆固醇的回收值异常低。这个情况代表该物质的瓶间差异稳定性与预期不符。出现有缺陷的分瓶是一个严重问题，因为临床实验室认为，国家认证的参考物质，能为方法校准验证提供一个稳定的参考点。而且由于价格昂贵且供应有限，这些参考物质通常每次只用一瓶，更加突出了分析物变异的潜在影响。用户能否识别出一个分瓶有缺陷，与分析物含量和超出预期稳定变异的大小有关。如果用户无法识别出不合格的参考物质或特定方法校准物质的分瓶，则校准可能会出错，对患者造成重要的临床影响。

  以血清为基质的参考物质有第二个局限性，会因基质变化导至校准错误。在临床实验室使用的许多常规分析系统中，基质修改的参考物质缺乏与真实临床标本相同的化学反应性。这种化学反应性的差异被称为已处理物质与分析检测系统的基质互相作用、基质效应或基质偏移。由于临床检测应用的特殊技术的特性，已处理物质的基质偏移，代表了化学检测系统的非特异性，可能不会影响患者标本的结果。

  基质相互作用是特定物质和方法组合的独特性质，可以定量测量。一些通用型参考物质已被证明适用于某些方法的校准验证，但不适用于其他方法。例如NIST SRM 909冷冻干燥人血清，在胆固醇的两种常规方法间没有发现基质的相互作用，但在另外两种方法间却存在。目前处理参考物质基质问题的策略，是通过胆固醇国家参考方法实验室网络，将新鲜血清与参考方法进行大量比较，从而建立方法校准。然而，这个方法成本高昂，且可能只适用于有限的分析物。对于仅针对单一分析物的参考物质，另一个有效的策略是对候选参考物质进行大量循环检测，以确定该物质与各方法间具有良好的互换性。WHO近期推出的载脂蛋白B参考物质就是一个例子，该物质与25种方法进行了适用性检测。

  当前使用的许多参考物质，没有经过基质局限性的严格评估。因此，使用这些参考物质的用户必须确认它们对某个特定方法的适用性。对于某个参考物质对某个方法没有基质局限性的错误假设，会导至校准错误和患者结果错误的不良后果。验证一个参考物质是否适用于某种方法是一个复杂的任务。目前已开发出一个可靠方案，来证明参考物质中存在基质干扰。

  通常，制造商提供的校准和准确度验证物质，仅适用于该制造商的检测系统。制造商负责设定相应靶值，将该系统检测的分析物与国家或国际准确度基准之间建立关联。但是，制造商对其特定检测系统的二级参考物质，不适合用于其他检测系统。通用型参考物质若要用于多种方法，必须对每个系统进行验证。二级参考物质的生产厂商应提供信息和靶值设定准确度基准的溯源性文件。另外，检测方法的厂商可就通用型参考物质是否对其方法适用提出建议。

  参考物质如何有用？一级参考物质和方法，为实现美国乃至全球患者标本检测结果的标准化和一致性提供了必不可少的工具。对于许多分析物而言，现在以准确度为基础的标准化已成为可能，并且已经取得了令人印象深刻的统一。由于检测标本的巨大压力和临床便利的需求，现代的常规方法在化学特异性方面做了妥协。但以血清为基质的参考物质在为临床实验室提供准确和统一的结果方面起着关键作用，但始终存在局限性。这些局限性可能是由参考物质的瓶间差异或化学基质的改变所导至。实验室专业人员必须认识到当前技术的现实情况，并制定校准和准确度评估策略，去适应可用方法和物质的已知局限性。

  必须继续研究开发具有稳定化学性质的方法和物质，用于临床检测实验室。已经开发出了改进的人血清配方 (组合)，用于总胆固醇和HDL胆固醇的检测。为了弥补基质的局限性，参考物质赋值的实用策略也已在研究。用于制造参考物质以及提供临床有效靶值的技术必须不断发展，为常规方法的标准化校准和患者标本检测结果的一致，提供具有成本效益的解决方案。