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乐为生医联合北京航空航天大学杭州创新研究院重磅推出:寡核苷酸偶联试剂盒 ...

2024-3-4 10:09| 编辑: mango524| 查看: 1316| 评论: 0|来源: 乐为生医|作者:净姐

摘要: 杭州乐为生医科技有限公司联合北航杭州创新研究院深度合作,倾心打造高效、简便寡核苷酸偶联试剂盒,助力超微量蛋白检测及蛋白质互作等领域的快速发展。 ...


杭州乐为生医科技有限公司&北京航空航天大学杭州创新研究院研发出一款高效、便捷 寡核苷酸偶联试剂盒。

本试剂盒通过化学反应将含有氨基的抗体、多肽、蛋白等与寡核苷酸偶联,用于偶联反应的寡核苷单链长度20-120碱基,双链80碱基对寡核苷酸的末端包含氨基修饰基团。
本试剂盒包含阳性对照和偶联反应所需的全部试剂、材料,无需客户自备特殊试剂、材料,节约时间、提高效率。

实验流程

01


寡核苷酸与抗体的活化与偶联

将寡核苷酸活化剂和抗体活化剂按照说明书要求溶解配置后,分别按照一定比例加入到寡核苷酸和抗体中,孵育。孵育结束后分别使用纯化柱和脱盐柱进行纯化和脱盐,得到功能基团活化标记的寡核苷酸和抗体。进一步将活化的寡核苷酸和抗体按照一定的摩尔比混合孵育过夜,即可得到抗体-寡核苷酸偶联物。

02


偶联效果验证

通过SDS-PAGE还原性或者是非还原性电泳检测偶联效果。还原电泳,在上样缓冲液中加还原剂(DTT等),打开二硫键(把轻链和重链打开),凝胶电泳,正常会有两条条带出现,分别在25kD(轻链)和50kD(重链),偶联上寡核苷酸后,根据寡核苷酸的大小,会显示出不同条带大小的重链和轻链,在25和50kDa仍有一些条带,也不能证明该抗体为偶联寡核苷酸,因为若此处的重链微偶联寡核苷酸,但此处抗体对应的轻链上可能有偶联寡核苷酸,或者另一条重链亦有可能偶联。

通过非还原电泳,即抗体整个蛋白进行电泳跑胶,通常蛋白条带在150kD附近,但是由于偶联有寡核苷酸,以及抗体经过活化等因素,移大小取决于其偶联的寡核苷酸大小。寡核苷酸越大,产生的条带越大,反之亦然。其次也与抗体上偶联寡核苷酸的个数有关系,偶联数量越多位移越大,反之亦然。连接到寡核苷酸上的抗体链的染色效率没有未标记抗体链高。因此应对凝胶图进行定性分析,而非定量分析。

此外通过溴化乙锭染色寡核苷酸可以更为显著的观察抗体-寡核苷酸是否偶联成功,如下图。

偶联剂不同的稀释比例、不同的稀释缓冲液、以及孵育时间等对偶联效果均具有一定的影响,因此,本试剂盒提供活化剂配套的缓冲液、及建议的稀释比例等条件,充分保证您实验的顺利开展。

03


游离寡核苷酸的去除

通过超滤方式去除游离未结合的寡核苷酸。为保证偶联反应中的抗体能够完全与寡核苷酸结合,在偶联反应中会投入过量的寡核苷酸,而在偶联反应结束后,将通过超滤的方式去除未结合的游离寡核苷酸,降低对下游检测实验的干扰,通过超滤方式去除游离寡核苷酸,高效、简便,并且对偶联产物的损失和功能几乎无影响。

寡核苷酸去除效果与超滤次数有相关性,可根据试剂盒说明书的建议进行,首次实验建议进行条件本摸索。本试剂盒提供超滤所需要用到的材料,方便您的使用。

04


偶联产物保存及应用

寡核苷酸偶联抗体的长期稳定性取决于多个因素,包括抗体和寡核苷酸本身、保存温度和保存条件。若短期使用建议在超滤缓冲液中-20摄氏度保存,如果长期使用及后续实验不受干扰,可在50%甘油条件下保存。偶联反应剩余的活化寡核苷酸和活化抗体可-20℃保存一个月。

杭州乐为生医科技有限公司根据客户需求提供抗体寡核苷酸偶联试剂盒及抗体寡核苷酸偶联技术服务,提供专业的售前技术指导及售后技术支持,为您的科研报价护航。

全国销售联系方式:19957893538

全国技术支持电话:18611591243

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