杭州乐为生医科技有限公司&北京航空航天大学杭州创新研究院研发出一款高效、便捷 寡核苷酸偶联试剂盒。 本试剂盒通过化学反应将含有氨基的抗体、多肽、蛋白等与寡核苷酸偶联，用于偶联反应的寡核苷单链长度20-120碱基，双链80碱基对寡核苷酸的末端包含氨基修饰基团。 实验流程 寡核苷酸与抗体的活化与偶联 将寡核苷酸活化剂和抗体活化剂按照说明书要求溶解配置后，分别按照一定比例加入到寡核苷酸和抗体中，孵育。孵育结束后分别使用纯化柱和脱盐柱进行纯化和脱盐，得到功能基团活化标记的寡核苷酸和抗体。进一步将活化的寡核苷酸和抗体按照一定的摩尔比混合孵育过夜，即可得到抗体-寡核苷酸偶联物。 偶联效果验证 通过SDS-PAGE还原性或者是非还原性电泳检测偶联效果。还原电泳，在上样缓冲液中加还原剂(DTT等)，打开二硫键(把轻链和重链打开)，凝胶电泳，正常会有两条条带出现，分别在25kD(轻链)和50kD(重链)，偶联上寡核苷酸后，根据寡核苷酸的大小，会显示出不同条带大小的重链和轻链，在25和50kDa仍有一些条带，也不能证明该抗体为偶联寡核苷酸，因为若此处的重链微偶联寡核苷酸，但此处抗体对应的轻链上可能有偶联寡核苷酸，或者另一条重链亦有可能偶联。 通过非还原电泳，即抗体整个蛋白进行电泳跑胶，通常蛋白条带在150kD附近，但是由于偶联有寡核苷酸，以及抗体经过活化等因素，移大小取决于其偶联的寡核苷酸大小。寡核苷酸越大，产生的条带越大，反之亦然。其 |
