一文读懂，qPCR耗材选择

荧光定量PCR检测技术已成为当前病毒核酸检测的主要手段，除了高质量的检测试剂、参数稳定的荧光定量PCR仪外，所选用的检测耗材的质量，也会对检测结果的准确性及灵敏度产生很大的影响。那么如何选择荧光定量PCR耗材呢？

高纯度

因为PCR/qPCR耗材通常会与试剂或样品直接接触，而聚丙烯（PP）材质是生物学惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有着良好的化学耐性，及温度耐受性（可以121℃ 高压灭菌，也可以承受热循环过程中的温度变化）。

这里强调一下耗材质量（是否干净）的重要性。PCR耗材必须保证没有污染物和抑制剂。高压和辐射能够去除细菌和DNA酶，但不能去除灰尘和DNA残留，它们可能会抑制PCR反应或产生非特异性扩增。物质是具有吸光度的，即便是很小的污染物也会吸收反应体系中的荧光，影响荧光信号的采集。因此，在生产这些塑料耗材时，从制模到最终的包装都必须在具有颗粒数量限制的设施环境中进行。

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不是的，管壁厚度会直接影响热传导率，极薄的壁厚可优化热传递减少循环时间。要想提升PCR反应效率，保证反应稳定高效进行，均一、超壁薄的PCR耗材才是不二之选。

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对于普通的PCR反应选用透明或者彩色的PCR管都是可以的，而彩色透明的PCR管更有助于进行样品分类管理。但qPCR更推荐选用优质的白色PCR耗材。由于qPCR需要实时定量检测荧光信号强度，更需要灵敏、精确的荧光信号传递。实验证明，与传统的透明PCR产品相比，白色PCR产品可最大程度地反射荧光信号，减少孔间信号交叉污染，可优化实时荧光定量PCR的结果。

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适合的才是最好的。常见的PCR板有平孔缘和加高孔缘两种。

平孔缘的反应板，可适用于大多数的PCR仪。

升孔缘的反应板，便于封膜，可降低样品间的交叉污染风险。

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这是由切角和标识的作用决定的。

切角：PCR板的切角位置选择取决于适配仪器要求，便于定位。

标识：PCR板的数字字母标记有助于识别单个孔及样品位置。一般为凸出的颜色数字标识或者印刻标识。对于一些自动化应用实验，印刻标记的反应板密封性会更好。

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选择宗旨：依据具体的实验要求选用合适的产品。PCR管的体积大多数都可以满足PCR反应的要求。在此基础上，推荐优先选用低容管。因为低容反应管/板有着较小的上方空间，可提高热传导率并降低蒸发。同时，在加样时需要避免加样过量或过少。过量会导至热传导率下降，溢出及交叉污染，而过少可能会造成样品蒸发损失。

常见反应管的规格及体积：

单管/8联管/12联管：0.5mL，0.2mL，0.15mL，0.1mL

96孔板：0.2mL，0.15mL，0.1mL

384孔板：0.04mL

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其实PCR/qPCR板的裙边是为了更好地适应自动化应用，可为仪器提供稳定的支持和机械耐受强度，且移液过程中的稳定性也会更高。PCR板一般分为无裙边、半裙边、全裙边。

根据具体的PCR实验要求选用适配的高质量封板膜，不仅能有效地保护样品，防止污染，还可以提供可信赖的实验检测数据。

提供温度耐受性和密封性强、高透明度、操作简便的高质量PCR/qPCR膜。

任何移液器，其性能和精确度都会因使用质量不佳或不合适的吸头而受到严重影响。移液器和移液器吸头作为一个系统，只有互相匹配才能保证准确地转移和输送液体。在掌握正确的移液技术后，匹配推荐的吸头，就能保证移液的精度。

一般分为：①袋装吸头、②盒装吸头、③低吸附吸头、④滤芯吸头、⑤自动化吸头等。

透明吸头VS.有色吸头

 当前，市场上吸头基本上都是用聚丙烯塑料（化学惰性高，使用温度范围广的无色透明塑料）做的。不过，同样是聚丙烯，品质差别也会很大：高品质的吸头一般都是用天然聚丙烯，而低廉的吸头则很可能用回收的聚丙烯塑料（这种情况下，最多能说其主要成份是聚丙烯）。

除此之外，多数吸头在制造过程中还会加入少量的添加剂，常见的有：

1、显色材料。在市场上俗称的蓝枪头（1000ul）和黄枪头（200ul），就是在聚丙烯中加入了相应的显色材料（我们希望是高品质的色母粒，而非低廉的工业颜料）；

2、释放剂。帮助吸头在成形后迅速与模具脱离。当然，添加剂越多，在移液过程中发生不受欢迎的化学反应的概率越高。