1、为啥要进行封闭？ 在体外诊断领域常用的方法学中，无论是免疫层析或是板式ELISA，胶乳免疫比浊或是磁微粒化学发光，或是更新的微流控技术，只要涉及了固相介质及免疫反应，都需要考虑由于反应体系中的蛋白质或生物分子与固相介质间的非特异性吸附，而给反应的特异性和灵敏度带来的负面影响。为了阻止这种非特异性吸附，使用不会参与反应的物质对固相介质表面进行封闭是一种很有效的方法。简单地说，在免疫学实验中，通常使用封闭剂来减少非特异性结合。 固相载体表面(如ELISA板，NC膜或者PVDF膜上等)有很多洞洞，通过电转或包被，胶上的蛋白被转移到了膜上，或抗原/抗体固定在板上，蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。 蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但蛋白并不是连续的，有很多空隙，而且比如说样品孔之间也有空隙，这些洞洞并没有填进东西，而抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样，就会有很多非特异性的信号。 封闭液中的蛋白可以与表面上的空白位置结合，同样以机械填补(堆积)和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和“覆盖”蛋白结合位点以避免一抗的非特异结合，所以有“封闭”的说法。同样这两种作用使封闭液中的蛋白能够很牢固的结合在空白位置上。这样，抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。 封闭剂应封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白、不结合靶蛋白表位、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。 2、理想的封闭剂应该是这样的：增强信噪比，降低非特异性结合，支持稳定
|
/3 
浙公网安备33010802005999号
