数字PCR是一种核酸分子的绝对定量技术。相较于测序和定量PCR技术，数字PCR拥有更高的灵敏度，可以检测到极低浓度的样本，并实现精准的绝对定量分析，在感染性疾病、肿瘤个体化诊疗等多个重要疾病领域展现出广阔的应用前景。 对，就是下面的这两个大家伙！！！左边罗氏，右边赛默飞，从颜色上来看，也是形成了犄角之势。
参数比对
此外，该系统还具备绝对定量、插入或缺失、拷贝数变异等多种分析模式，可通过实验室信息系统（LIS）对样本进行信息自动化溯源，具有操作简便、通量高、速度快、通道全等性能和优势。 Applied Biosystems™ QuantStudio™ Absolute Q™数字PCR系统采用具有专利的微流体阵列式芯片技术。相比于其他数字PCR平台，该系统可在20480个固定纳米级微孔中生成95%以上的有效反应液滴，具有更少的死体积，且ROX通道具有质控功能，非正常液滴予以排除分析；PCR扩增前后信号采集，自动排除假阳性。配备3个LED光源，最多支持5个荧光检测通道(工厂校正)，每份样本中可进行多靶标检测。
数字PCR是将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元（nL，纳升级别）中，使得每个反应单元中尽可能含有1个模板分子，并在此基础上进行扩增、检测和分布统计，从而实现靶标分子的绝对计数。 根据微反应单元的不同形式，数字PCR产品可分为微板式、微滴式和芯片式等。目前，市场上主要的数字PCR产品主要是基于微滴式和芯片式等。 与第一、二代PCR技术相比，数字PCR具有很多优势： 一是特异性、灵敏性均有显著提高； 二是在不依赖内参和标准曲线的前提下，可直接得到绝对量化指标； 三是微反应单元相互独立、封闭，避免了PCR抑制剂及不同核酸分子扩增产物间的相互干扰，准确度和可重复性较高。 数字PCR产品的发展，为不同场景下的多样化核酸检测需求提供了新的思路，尤其是在医学检验方面，在感染性疾病早期检测、癌症的液体活检、无创产前检查等领域展现出良好的应用前景。 ◆ 实现感染性疾病早期高效检测 一是病毒检测。第二代荧光定量PCR检测技术是目前新冠病毒检测的“金标准”，但由于病毒探针结合位点突变、样本病毒载量不足等原因，在临床检测过程中经常出现假阴性结果，由于数字PCR具有更高的灵敏度、精准度，以及其适合痕量样本检测的特性，能够检测出荧光定量PCR检测过程中错过的感染，可作为后者的补充。 二是临床样本病毒载量评估。在人群筛查及临床诊疗中，为科学选取采样方式，需要评估不同临床样本病毒载量，如鼻咽拭子、血尿、粪便、肺泡灌洗液等，由于数字PCR可提供绝对量化指标，为采样方法的选取提供了参考，从而提高检出率。 三是监测环境病毒载量。数字PCR可对低核酸丰度样本进行有效检测，包括从不同环境中取样的样本，如病房、医院卫生间、实验室等等，在疫情防控中起到了不可忽视的作用。此外，数字PCR的应用场景还有病程不同阶段的病毒载量评估、核酸参考品制备、抗病毒药物研发等环节。 ◆ 助力癌症液体活检，实现患者全病程监控 液体活检是普通癌症检测的延伸和补充方法，将目标采取样本从组织延伸到血液、体液。数字PCR可精确检测转移到血液循环中的肿瘤细胞和DNA片段，提供基因突变情况等信息，动态监控患者病程的发展，从而为伴随诊断和个性化治疗提供可靠依据 ◆ 高效筛查胎儿疾病，提高无创产检普及性和依从性 通过无创产前检查，针对胎儿染色体非整倍体异常、遗传性基因疾病等进行风险评估对于家庭幸福保障、减轻社会负担具有重要意义。目前，大多数商品化的无创产前检查产品都是基于二代测序的技术和平台，该方法检测周期长（1-2周出报告）、技术门槛高、检测费用高，阻碍了进一步广泛应用。数字PCR技术为该领域提供了一种新的解决方案。根据相关研究，基于数字PCR的无创产前检测技术有望实现准确、快速、简便的产前筛查。 除上述场景外，数字PCR技术还有望在二代测序文库质控和结果验证、环境及食品检测等领域，成为第一、二代PCR技术的重要补充手段。 |
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