结核病诊断新产品盘点

从上图可以看出，不同方法学有各自的优劣势。

从现有结核诊断技术的发展来看，主要方向是保证原有方法学优势的前提下，通过新技术弥补短板，从而强化新方法的整体价值。

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新技术/产品介绍

1.涂片染色新产品

涂片染色主要包括传统的萋尼染色和新的荧光染色。

目前很多基层实验室只做萋尼染色，抗酸染色便宜价廉，但能做好非常不易，劳动强度大，需要至少观察300个视野，检出限为10000CFU/ml。

传统涂片染色的灵敏性低,同时假阴性率较高,从而导至结核病的检出率偏低。

想要弥补上述缺点，就要提高染色的敏感性，这里举个例子。

上海孚清生物新进开发和上市的Fullscan产品，采用结核适配体技术，能直接区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌，最低检测下限达到1000CFU/ml,，比传统抗酸染色提高了一个数量级。

适配体可与结核分枝杆菌细胞壁上的特殊糖脂结构特异性结合，并标记荧光染料，通过配套的荧光显微扫描分析系统识别荧光，得出结果。

2.免疫学新产品

传统的免疫学检测方法包括结核抗体、结核菌素皮肤试验（TST）、γ干扰素释放试验（interferon-γ releaseassay,IGRA）。

在过去，TST一直是诊断潜伏感染及辅助诊断活动性结核病的金标准。

借助皮下注射结核分枝杆菌复合群菌株蛋白衍生物，观察人体对其免疫应答，从而判断患者是否被结核分枝杆菌复合群感染。

由于早期使用的TST是牛型分枝杆菌的蛋白衍生物，因此无法有效区分卡介苗（BCG）接种与结核分枝杆菌感染造成的阳性结果。

新一代TST

智飞生物新进上市的国家1类新药宜卡®属于新一代TST。

宜卡®运用基因重组技术融合表达ESAT6-CFP10蛋白，于2019年获国家发明专利授权，具备准确可靠、安全有效的特点，且操作简便、易行，适合高通量应用。

宜卡®的使用不受实验室条件的限制，无论在“三甲医院”、乡村诊所均可使用。

与传统的PPD联用可以有效区分卡介苗接种和结核感染。

不过，采用皮下注射48～72 h后的判读方式可能会影响TST在人群中的使用范围。

新一代IGRA

类似于智飞生物的融合蛋白，其检测原理与其他免疫学技术一致。

均是选取了存在于结核分枝杆菌，但在卡介苗和大多数非结核分枝杆菌中普遍缺失的RD1区和RD2区编码的ESAT-6、CFP-10、Rv1985c蛋白，应用基因工程技术将其表达成为融合蛋白。

IGRAs的代表产品是T-SPOT和ELI-SPOT，已经在国内上市多年。

其原理是当机体内被结核菌抗原致敏的效应T细胞，在体外受到相同抗原的刺激（在APC细胞辅助下）后，会分泌大量的γ干扰素。通过IFN-γ的检测来判断结核感染的情况。

IGRA在临床中使用的主要问题在于无法区分潜伏感染和活动性结核。

最近迪澳生物发布了其新一代结核诊断产品DeFine.TB。

该产品在IGRA的基础上做了升级，引入新的检测靶标IL-2。

原理是分离外周血单个核细胞，将定量的单个核细胞与融合蛋白在细胞培养板上共培养，T细胞受抗原刺激而分泌γ-干扰素及白细胞介素-2。

再利用双抗体夹心酶联免疫法检测γ-干扰素、白细胞介素-2的浓度，来判断其是否存在结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应。

相关研究表明，双指标联检可以提高检测的敏感性和特异性。

新一代细胞免疫学检测产品

据报道，苏州创澜生物的结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒（IP-10.TB™）获批上市，这是全球首个获批上市的基于IP-10mRNA靶标的结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒。

原理是利用实时荧光PCR技术体外检测全血样本中经结核特异性抗原刺激前后IP-10mRNA水平，并据此判断人体是否有针对结核特异性的细胞免疫反应。

配合全自动核酸提取及反应体系构建系统，可以为结核检测提供自动化解决方案。

除此之外，目前正在研究中还有不少细胞因子和生物学标志物可用于结核病的诊断，相信后续会有越来越多的新标志物和商品化产品问世。

3.分子诊断新产品

PCR方法检测结核分枝杆菌由来已久，包括荧光定量PCR和等温扩增方法，也发展出不少POCT分子诊断方法。

荧光定量PCR主要有赛沛的Xpert MTB/RIF系列产品，罗氏的Cobas TaqMan MTB产品，雅培的RealTime MTB和MTBRIF/INF产品，Hain公司的Genotype MTBDRplus、Genotype MTBDRsl、Fluoro TypeMTBDR产品，BD公司的MAX-MDR-TB产品，厦门致善公司的MeltPro-TB产品等。

赛沛新一代结核检测产品包括Xpert MTB/RIF Ultra、Xpert MTB/XDR，基于原XpertMTB/RIF产品的系统和方法学，不同的是Ultra的灵敏度更高，检测时间更短。XDR则可以检测包括异烟肼、氟喹诺酮类等在内的多重耐药，被定位为MTB/RIF或Ultra检测到利福平耐药患者的附加检测。

Ultra和XDR在国外已获得批准用于临床检测，获得了WHO的推荐，提高了结核分枝杆菌的检测灵敏度，特别是在检测脑脊液、胸水等标本中的结核分枝杆菌时取得了非常好的效果。

等温扩增方法

日本荣研株式会社TB-LAMP产品是利用环介导等温扩增技术，快速、高效、特异性检测结核分枝杆菌复合群新型分子诊断产品。 

世界卫生组织推荐TB-LAMP或许可替代显微镜检查（有条件推荐），以帮助诊断有结核病症状和体征的成人肺结核。

对于有肺结核症状和体征的成人，特别是痰涂片阴性标本需要进一步检测时，或许也可考虑作为显微镜检查的后续检查。但TB-LAMP不能代替快速分子试验来检测TB和利福平耐药，尤其是MDR-TB高危人群。

除此以外，核酸质谱技术检测结核分枝杆菌对抗结核药物的耐药性也将会得到很好的应用，特别是基于纯培养的全基因组测序技术在结核分枝杆菌分子药敏的检测方面更加具有非常好的临床应用价值，前景广阔。

参考文献（略），图片来自网络，侵删。