体外诊断试剂分析性能评估要点

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体外诊断试剂的分析性能评估主要包括样本稳定性、适用的样本类型、准确度(accuracy of measurement)、正确度(trueness)、精密度(precision)、分析灵敏度(analytical sensitivity)、分析特异性(analytic specificity)、高剂量钩状效应(high dose hook effect)、测量范围(measuring range of the assay)、检验方法的确认、可用性(usability)以及校准品的量值溯源和质控品的赋值(metrological traceability of calibrator and control material values)等项目的研究，是非临床研究的重要组成部分之一。

建议充分考虑实际使用过程中样本采集、处理、运输、储存等各个阶段的条件，对不同类型临床样本的稳定性分别进行评价。内容包括建议的存储条件、添加剂(如抗凝剂)和运输条件(如时间、温度和冻融次数)。

对适用的样本类型及添加剂进行适用性确认，可以列表形式说明各项分析性能评估中使用的样本类型及其来源，包括人为添加分析物的样本。如果选择具有代表性的特定样本类型代替其他类型(如不同的呼吸道分泌物)进行适用项目的评估，应说明原因并提供证据支持。注意对样本的制备或处理方式进行验证，并提供使用不同方法采集的样本(如拭子或其他手段)之间关系的信息。如适用，还应明确临床诊断信息、病理组织类型等。

明确检测系统适用的全部校准品和定值质控品。其中校准品应提交溯源性文件，内容包括量值溯源到参考物质或参考测量程序的方法和可接受标准，以及各个层级校准品的量值传递和确认过程。另外，建议进行不确定度的计算并明确扩展不确定度，如采用合并估算从参考物质到产品校准品的各个制备步骤不确定度的方式，并提交研究资料。如适用，应进行基质效应评估，评价校准品或质控品与临床新鲜样本之间的差异对检测方法准确度的影响。

定值质控品应提交所有适用机型上进行的赋值或验证试验资料。

测量准确度包括正确度和精密度(过去仅包括正确度)，受系统误差和随机误差共同影响，是体现测量总误差的独立指标。其中正确度受系统误差影响，表现为偏倚;精密度受随机误差影响，表现为标准偏差。准确度受系统误差和随机误差共同影响，是体现测量总误差的独立指标。

建议综合考虑不精密度和偏倚的影响，首选采用总分析误差较小的对比方法进行比较研究。

2．4．1 正确度 包括与参考物质或者参考测量程序或诊断信息进行比较研究、回收试验、方法学比对等。正确度的评价仅在可使用参考标准或参考方法时，适用于定量和定性测试。

样本可为有明确诊断结果的患者样本、参考样本盘、从类似病史患者获取的相同或者不同浓度分析物的混合样本池(数量不超过 20%)等。如使用稀释或者经处理去除分析物获得低浓度样本、添加分析物获得高浓度样本、质控物质等人工制备样本，应同时考虑基质效应的影响，保证与临床样本的检测结果无显著偏差。

2．4．2 精密度 即重复性和重现性，内容包括运行内的变异和运行间、日内、日间、批次间、操作者间、仪器间和地点间的变异。如适用，还应包括校准频率或校准稳定性。

样本可为充分模拟临床样本的稳定冷冻样本池或蛋白基质样本。如不同分析物浓度水平样本的精密度不恒定，则应使用更多浓度水平的样本进行评估。

包括空白限(limit of blank，LoB)、检出限(limit of detection LoD)和定量限(limit of quantitation，LoQ)。

空白限定义为无分析物样本检测结果的最高值。检出限是指含分析物样本可被检出的最低浓度。定量限是指分析物能被可靠检出的最低浓度，即不确定度在设定范围内。

样本可为相似数量的零浓度水平和低浓度水平分析物样本，基质应与临床样本相同或类似。

包括交叉反应(cross reactivity)和干扰物质(interference)。

交叉反应评估的物质包括分析物的结构类似物、具有同源性序列的核酸片段、易引起相同或相似的临床症状的其他病原体、采样部位正常寄生或易并发的其他微生物等。

建议在分析物的两个医学决定水平，对样本中可能存在最高浓度水平的潜在干扰物质进行筛查，如常见的内源性干扰物质(血红蛋白、脂质、胆红素和自身免疫抗体)、常用药物及其代谢物、患者群体使用的药物和异常代谢物、样本添加剂(抗凝剂和防腐剂)和已有报道的干扰物质等。

样本可为添加分析物的新鲜样本池或充分模拟物。干扰物质可使用尽可能纯的或者接近体内循环的形式、不低于 20 倍稀释的高浓度储备溶液，并考虑溶剂的影响。

对于特定方法学(如基于免疫反应)的产品，建议对含有高浓度或滴度分析物的样本进行梯度稀释后由低浓度至高浓度开始，每个梯度的稀释液重复多份检测进行验证，并明确不产生高剂量钩状效应/前带效应的最高浓度或滴度。

包括线性测量系统的线性范围和非线性测量系统的测量范围。

测量范围的评价包括可报告范围的低限与高限。可报告范围的低限为 CV 值不大于可接受界值的最低浓度水平，高限为线性范围的上限与最大稀释倍数(与理论浓度的总误差不大于可接受界值)的乘积。

样本可通过精确地按比例混合接近线性范围上限的高浓度样本池和接近线性范围下限的低浓度样本混合物制备。应尽量使用不含干扰物质的样本混合物，如使用稀释或者经处理去除分析物的低浓度样本、人工添加分析物的高浓度样本或者质控物质等，应充分考虑基质效应以及对分析物生理形式的影响。样本浓度应至少覆盖线性范围的上限、下限和医学决定水平。

如适用，还应对预期非专业使用者的行为、能力和局限性等因素对产品实现预期性能影响进行评价。

可采用对专业检验人员、非专业检验人员(如医生、护士)或无医学背景使用者进行比较研究以及与临床公认的对比方法进行比较研究的方式，评估申报产品实际使用时的性能以及使用者按照说明书的要求正确使用该产品的能力。

3．1．1 测量准确度 可采用与参考物质或者参考测量程序或者其他方法进行比较的方式，持续 3 到 5 天，使用至少 100 个样本对测量程序之间的差异进行研究，通过绘制差异图和散点图，然后进行回归分析评估偏差。样本应来自对预期适用人群具有代表性的受试者，浓度应尽量均匀覆盖测量范围。另外，建议在至少 20 个测试日，每日进行两次运行或测试，对至少两个分析物浓度水平(包含接近医学决定水平)的两个样本和一个质控进行评估。

本文在对目前我国相关产品注册申报中存在的问题以及审评工作中存在的难点进行全面梳理的基础上，对体外诊断试剂分析性能评估的要点进行了初步探讨，结合国际通用注册申报规范性文件，阐述了分析性能评估的概念、包含的内容以及定性检测和定量检测试剂分析性能评估推荐的研究方法。

预计将帮助生产企业更具针对性地进行申报产品的分析性能验证，相应地大幅提高产品设计开发的效率。期待与各方协作探索更加优化的产品评价路径和方法，共同努力提高相关产品的研发效率以及提升研究质量。