【冯仁丰】介绍2020年的ISO 17511文件第二版（9）标准中词语定义的一些内容（5）

在ISO 17511第二版的词语解释中，我注意到关于一级参考物质的定义。

3.35 一级参考物质（primary reference material，primary RM）

分析物（3.1）的高纯度物质，证实了材料中分析物（3.1）的质量/摩尔分数，它的成分实现了关注的分析物（3.1）的国际单位制（SI）。

注释1：一级RM具有它的设定值，或是直接被一级RMP（3.36）设定、或间接地以相应分析方法确定材料中的不纯物（如，mass balance method质量平衡方法）。

这个一级参考物质的定义，指出了分析物是高纯度的物质，证实了物质中分析物的质量/摩尔分数，它的成分实现了关注的分析物的国际单位制。请注意，这个参考物质中分析物在整个该材料中的质量/摩尔分数。特别请注意的是，在注释1中，特别说出了：一级参考物质（RM）具有它的设定值，或是直接被一级RMP设定、或间接地以相应分析方法确定材料中的不纯物（如，质量平衡方法 mass balance method）。

特别是：一级参考物质的设定值以间接地以相应分析方法确定材料中的不纯物。究竟一个目前国际上公认的一级参考物质是如何介绍和叙述的？

为了说明怎样的参考物质是一级参考物质。

我以美国国家标准和技术研究院（NIST）发布的标准参考物质（SRM）911b的胆固醇证书为例。

胆固醇：

这个标准参考物质（SRM）被作为已知纯度的化学物批准的。它主要被预期用于对临床样品测定胆固醇程序的校准和标准化，以及作为这些程序应用标准的常规评价。提供的该SRM为含有2g的包装。

胆固醇certified value认定值，纯度99.8% ± 0.1%。

该纯度和估计的不确定度是依据科学判断和在认定过程中对这个SRM应用了大量分析检测评价。给出的不确定度大致为该认定值的两个标准差。

物质来源：这个SRM使用的胆固醇，由来自JBL科学公司得到制备的。

在NIST的有机分析研究部的G.D.Byrd，S.N.Chesler，R.G.Christensen，A.Cohen，B.Coxon，M.J.Welch，和E.White V，和NIST 无机分析研究部的D.A.Becker和G.Marinenko进行的分析。

由NIST的有机分析研究部的A.Cohen进行领导进行技术检测全面指导和合作。

NIST的国家检测实验室的R.C.Paule提供了统计咨询。

关于这个SRM的制备、认定和issuance发布的技术和支持方面，通过标准参考物质计划的R.L.Mckenzie的协调。这个证书的更新通过标准参考物质计划的J.C.Colbert协调。

样品制备（准备）和均一性：该物质中伴随的类固醇以溴处理去除，以锌脱卤化，并在甲醇中重结晶。这个SRM的均一性，以气相层析-质谱和差示扫描量热法确定。也以这些技术和在确定该物质实施的大量更多分析确定纯度。

信息值：实施了确定物质的更多分析。以下叙述的这些检测的结果，仅作为信息目的。这些值没有被认定，但它们会因用户有需求而提供。

SRM的样品以N,O-双（三甲基甲硅烷基）乙胺[N,O-bis(trimethylsilyl) acetamine]被衍生，使用一个30 m的非极性毛细管柱进行气相层析-质谱分析。检出了三个不纯物，具有的储留时间和表现的分子量与真实的7-脱氢胆固醇（0.03%）、菜油甾醇（0.05%）和谷甾醇（0.05%）相同。在估计检出水平0.02%处，没有观察到胆固醇中两个通常的不纯物，烯胆甾烷醇和胆甾烷醇。

红外吸收或核磁共振没有检出不纯物。紫外吸收光谱（在4%dichloromethane二氯甲烷）显示了大约在296、309、324、和350nm处的λmax显示有faint微弱trace痕迹的峰。

差示扫描量热法指示了0.095 百分摩尔的不纯物。在硅胶GF上的薄层层析，使用9:1（v/v）氯仿-丙酮，以20%液相磷酸喷洒，在110℃加热，给出了三个痕迹斑点，不显眼，但在365-nm UV光下具有荧光。相对于胆固醇的斑点的Rf（Retardation factors滞后因素）值为1.86、1.22、和0.56。在真空下密封管内的熔点为149.0-149.2℃。比旋转为-39.94°[c，4.0；CHCl3]；此处c为胆固醇在CHCl3中的浓度，每100 ml CHCl3为4g。经1.5 μm的绝对微孔的瓷漏斗过滤，确定的不溶物为0.017%。在60℃真空0.05 Torr（6.7 Pa）干燥下重量的损失为0.02%。被燃烧的总灰烬量为0.006%（850℃）。

中子活化分析指示了约溴含量为38 μg/g，氯含量为6 μg/g。碘少于0.1 μg/g。

警告：这个SRM仅用于“体外”诊断。

这个物质的稳定性和储存：该SRM应储存在紧盖的瓶中，并保持在冰箱中（-6℃到24℃）。不可暴露在热、阳光直晒或紫外光照射下。开瓶后该物质应放置在充惰性气体的干燥器内，并保存在-15℃下。在开瓶前应置室温下平衡。若能这样保存，可以不需干燥。NIST的经验，将SRM 911a储存在-15℃下的惰性气体中，说明SRM911b在相同条件下，稳定性会超过10年。若该物质储存超出了认定规定日期而降解，NIST将通知用户。如果该物质储存在冰箱（2~8℃），建议该物质应在NIST货运日期起的3年后不可使用。如该物质在室温下暗处保存，建议在NIST货运日期起的6个月后不可使用。

这个SRM 911b是当今临床实验室进行总胆固醇检测的一级参考物质。从这个证书内容上，清楚地说明，该胆固醇的含量，不是对内含的胆固醇进行的检测，而是对该物质中内含的非胆固醇不纯物质进行的分析。然后经过统计确定该胆固醇内含有的不纯物质估计为多少。从100%中减去不纯物，即为该参考物质内胆固醇的含量为99.8%。这个数值的不确定是由各个分析各种不纯物质分析得到的数据归纳而成。由于该物质出现的时间很早，因此，仅仅以所有不纯物质分析归纳的标准差的2倍，作为不确定的数据。