肿瘤生物标志物研究仅是一个发现，离临床产品化，中间还有很长的一段路要走！
生物标志物（Biomarker）是一种可客观检测和评价的特性，可作为正常生物学过程、病理过程或治疗干预药理学反应的指示因子。寻找和发现有价值的生物标志物已然成为当前医学领域的研究热点，然而开发生物标志物成为商业化的临床产品，中间明显还有很长的一段路要走。
今天与大家分享12月9日来自南京国际生命健康科技大会 —— 肿瘤NGS精准检测高峰论坛上，中国食品药品检定研究院（中检院）黄杰 研究员带来的报告：“肿瘤标志物研究与产品实现”。（以下内容仅供学习参考）报告的内容包括以下三部分：
⒉肿瘤检测产品的开发过程；
⒊产品实现中的关键点。
公开数据显示，日本的癌症5年相对生存率为 69.0%，美国的癌症5年相对生存率为 66.9%，中国的癌症5年相对生存率仅为 40.5%，肿瘤早期诊断是降低肿瘤死亡率主要且有效手段。
肿瘤是个复杂的疾病，进化过程长，标志物多样。可能的肿瘤检测标志物有多种，包括ctDNA突变、CNV、甲基化检测、miRNA、蛋白等，可以被应用于癌症患者的不同时期的检测，比如早期诊断、治疗监测、复发监测、肿瘤进化、预后、疗效预测、肿瘤微环境检测、宿主免疫力评估等。
● 肝癌早筛标志物：除了常规的免疫学方法检测的肿瘤标志物 AFP 等以外，还有miRNA，比如miR-122，miR-192等；● 膀胱癌预后标志物：尿液ctDNA，可反映膀胱癌患者预后状态；● 预后判断标志物：外泌体miRNA，不同预后患者外泌体miRNA存在差异；● DNA甲基化标志物：基因组DNA的低甲基化是最早发现的人类癌症组织的表观遗传学上的改变之一。比如，美国FDA批准的结直肠癌早筛产品 Cologuard® 检测了NDRG4和BMP3基因甲基化，中国NMPA批准的结直肠癌辅助诊断产品 长安心 检测了SDC2基因甲基化等；● 循环肿瘤细胞（CTC）标志物：个性化用药指导及治疗后的病情监测，判断预后等；● 免疫组库检测（TCR多态性检测）标志物：外周血T淋巴细胞多样性可反应患者的T细胞识别能力，肿瘤浸润T淋巴细胞与外周血重合度可反应患者的抗肿瘤免疫激活程度；● 肠道宏基因组学及代谢组学标志物：微生物组合代谢组的变化发生于结直肠癌发展的早期阶段，或具有重要的病因和诊断意义，但目前局限于研究阶段，离临床产品化距离还远；● 糖蛋白糖基化差异标志物：体外检测人血清样本中糖蛋白里寡糖链的含量，可辅助肝癌的诊断。
生物标志物研究仅是一个发现，离临床产品化，中间还有很长的一段路要走：发现研究 ➝ 验证研究 ➝ 方法确认 ➝ 临床验证。
以IVD产品研制过程为例，从立项到临床应用（立项-小试-中试-试生产-临床应用）应严格遵守 ISO13485 医疗器械质量管理体系的要求。⒈立项：开发建议书，开发策划书，评审报告，开发任务书，开发计划书等。立项依据非常重要，需要能解决明确的临床问题！⒉小试：设计开发验证报告，设计开发评审报告（样品试制）等：主要原材料研究资料；主要生产工艺及体系研究资料；阳性判断值或参考区间确定资料。设计开发需要建立、验证并确认合适的技术方法学，这可以根据前期的研究结果，同时结合企业自身的优势，选择适合的检测方法！比如BRCA的CDS±多少合适？±2bp？±15bp？还是±20bp？需要说明±多少具体覆盖的情况。比如TMB，Panel区域设计？TMB计算规则?TMB计算饱和度验证？等。⒊中试：设计开发验证报告，设计开发评审报告（中试）：分析性能评估资料；稳定性研究资料；产品技术要求；产品说明书；标签样稿。需要根据产品预期用途确定相关技术指标；分析性能评价及临床性能评价，其中分析性能评价需要合适的参考物质：和检测样本类型一致或近似，和技术原理要求相一致，和靶标在样本人群中的分布一致，能反映设定的技术指标。⒋试生产：设计开发评审报告（试产阶段）— 风险管理报告— 设计开发评审报告（确认阶段）：综述资料；生产及自检记录，产品风险分析资料。
● 临床需求：产品立项时需要考虑能解决的临床问题是什么？临床的需求有多大？市场前景如何？● 与现有方法的性价比：产品性能及价格到底有没有优势？是否比现有产品的性价比更高？否则开发的意义是什么？
● 技术方法：可结合产品及企业的优势，选择合适的技术方法，是qPCR？NGS？芯片还是其他技术方法？产品如涉及到算法模型需要通过训练集、验证集及临床确认集来判断是否符合产品预期用途。
● 产品工艺：产品工艺确认：原材料购买及检验，标准品或质控品确定？国家也发布了一些肿瘤基因检测标准品，比如BRCA基因突变国家参考品，EGFR/ALK/MET基因突变检测国家参考品，血浆ctDNA KRAS/NRAS/EGFR/BRAF/MET基因突变检测国家参考品，肿瘤突变负荷（TMB）国家参考品等（中检院TMB注册检验国家标准品和参考品说明书）。其次，产品工艺化生产也很重要！
● 检测过程：检测细节，产品的性能评估，稳定性评估等。
● 质量控制：应严格遵守ISO13485医疗器械质量管理体系的要求，稳定的产品需要可控的质量控制参数的建立与持续运行。
● 临床试验：注册检定，参考值确定等。
● 明确应用的局限性 ......
参考资料：
1. 黄杰,肿瘤标志物研究与产品实现,PPT,南京国际生命健康科技大会,肿瘤NGS精准检测高峰论坛,20191209.
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