审评报告全文公开｜基因突变检测试剂盒（可逆末端终止测序法）

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基本信息（申请人名称，申请人住所，生产地址）

产品审评摘要（产品概述，临床前研究摘要，临床评价摘要，风险分析及说明书提示）

综合评价意见

申请人名称

南京世和医疗器械有限公司

申请人住所

南京市高新开发区新锦湖路3号-1中丹产业园A-7楼

生产地址

南京高新技术产业开发区新锦湖路3号-1中丹生态生命科学产业园一期A栋7楼701、708-712，B栋18层

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

表1试剂盒主要组成成分

试剂盒具体组成成分及配套试剂及软件见说明书。

（二）产品预期用途

本试剂盒用于定性检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者经福尔马林固定的石蜡包埋（FFPE）组织样本中EGFR、ALK、ROS1、BRAF、KRAS、HER2基因的多种变异。其中，EGFR

基因19外显子缺失及L858R点突变用于吉非替尼片及盐酸埃克替尼片的伴随诊断检测，T790M点突变用于甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断检测；ALK基因融合和ROS1基因融合用于克唑替尼胶囊的伴随诊断检测（具体可参考表2）。

表2伴随诊断用途的基因变异类型及相应的靶向药物

表3中为本试剂盒可以检出，但未经伴随诊断验证的基因突变类型。

表3未经伴随诊断验证的基因突变类型

其检测结果仅供临床参考，不应作为患者个体化治疗的唯一依据。临床医生应结合患者病情及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。

（三）产品包装规格

12人份/盒；48人份/盒。

（四）产品检验原理

该试剂盒采用DNA探针捕获技术，首先对从NSCLC肿瘤FFPE样本中提取的核酸（DNA）进行片段化、加接头、PCR扩增等步骤制备文库，其后采用具有特定序列的DNA探针与文库进行杂交，从而特异性捕获来自人类基因组6种基因中的部分外显子与内含子区域，之后通过磁珠法富集被探针捕获的目标区域DNA片段。再对捕获富集后的文库进行定量与质控后，采用基因测序仪（型号：MiSeqDx，Illumina公司生产）进行高通量测序。对于测序数据，采用生物信息学软件判读6种基因中是否存在来自肿瘤的变异。

二、临床前研究摘要

（一）主要原材料

1.主要原材料的选择该产品的主要原材料包括：寡核苷酸接头、通用PCR扩增引物、富集探针、链霉亲和素磁珠、阴性对照品、阳性对照品等，这些原材料均为外购方式获得，其中富集探针为申请人自行设计后由专业的合成公司合成。申请人选择了2-3家有资质的供应商提供的原料，通过功能性试验，筛选出最佳原材料和供应商，制定了各主要原材料质量标准并经检验合格。

2.企业参考品和对照品设置情况：企业参考品包括阳性参考品、阴性参考品、最低检测限参考品和精密度参考品。所有参考品均经过已上市试剂盒/Sanger测序方法和/或其他平台NGS法验证,其中：

阳性参考品9份，为相关基因变异阳性的临床样本，涵盖了该产品可检出的所有基因变异类型。

阴性参考品1份，为EGFR/ALK/ROS1/BRAF/KRAS/HER2基因变异阴性的汉族健康人白细胞DNA样本。

最低检测限参考品为阳性参考品在相关检测项目进行前以阴性参考品稀释获得，涵盖了该产品可检出的所有基因变异类型。其中EGFR/ROS1/BRAF/KRAS/HER2基因突变比例为1％和ALK基因融合比例为2.5％。

精密度参考品4份，为相关基因变异阳性的临床样本，突变比例为15~30%。

该产品设置了阴性对照品及阳性对照品。其中，阴性对照品为汉族健康人白细胞DNA，阳性对照品由相关基因变异阳性质粒混合汉族健康人白细胞DNA制备，涵盖各基因的代表性变异类型，具体为EGFR基因L858R点突变、ALK基因融合、ROS1基因融合、BRAF基因V600E突变、KRAS基因G12C点突变及HER2基因20外显子插入，用于检测过程中试剂和仪器的质量控制。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人通过使用初步确定的配方进行反应体系配制，对反应体系中的样本核酸提取试剂、样本DNA用量、DNA聚合酶用量、聚核苷酸激酶用量、DNA连接酶用量、Mg2+离子浓度、dNTP用量、接头用量、扩增引物浓度、PCR反应体系、杂交探针用量、寡核苷酸序列用量等进行筛选和优化，通过临床样本进行功能性试验，最终确定了最佳的生产工艺和反应体系。

（三）分析性能评估

分析性能评估内容包括阴/阳性参考品符合率、分析灵敏度（最低检测限）、精密度（重复性）评估、分析特异性（交叉反应和干扰因素）、核酸提取纯化配套试剂组合性能研究、肿瘤组织细胞含量研究等。

在阴/阳性参考品符合率实验中，采用阳性参考品及阴性参考品在3批成品试剂盒（批号：20140715、20140720、20140725）分别评价了试剂盒的阳性参考品符合率和阴性参考品符合率，符合率均为100%。同时选取21个阳性临床样本和5个阴性临床样本（所有样本的基因变异类型均经已上市试剂盒/Sanger测序方法和/或其他平台NGS法验证）在3批成品试剂盒（批号：18040801、18041101和18041401）上分别进行检测，结果均能正确检出。

在分析灵敏度（最低检测限）实验中，申请人选择带有已知突变的临床样本和无突变的临床阴性样本（均经已上市试剂盒/Sanger测序方法和/或其他平台NGS法验证），根据样本的原始突变比例，按照不同比例进行稀释，通过3批试剂盒（批号：18040801、18041101和18041401），每种突变类型设20次重复检测，评估了每种突变比例的检测情况，最终确定：EGFR基因G719位点、T790M、L858R及19外显子缺失、ROS1基因融合、BRAF基因V600E、KRAS基因G12及G13位点和HER2基因20外显子插入，不低于95%检出率的最低检测限均为1%；ALK基因融合的最低检测限为2.5%。用3批成品检测试剂盒（批号：20140715、20140720、20140725）进行检测限参考品的检测，每种突变类型设20次重复检测，结果均能正确检出。

在精密度（重复性）研究中，申请人采用精密度参考品在3批成品试剂盒（批号：20140715、20140720、20140725）上分别完成10次重复检测，检测结果一致。同时在不同突变比例的临床样本中验证了精密度（均经已上市试剂盒/Sanger测序方法和/或其他平台NGS法验证），选取阴性临床样本、弱阳性临床样本（2％-5%突变比例）和中阳性临床样本（24％-30%突变比例），每个样本重复检测12次，在3批成品试剂盒（批号：18040801、18041101和18041401）上分别完整评价了本产品的批内、批间及检测日内、日间和操作者间精密度，检测结果一致，表明试剂盒精密度良好。

分析特异性实验涵盖交叉反应研究及干扰因素研究。所用临床样本包括EGFR基因15种其他突变类型、BRAF基因2种其他突变类型、KRAS基因4种其他突变类型、HER2基因6种其他突变类型、MET基因1种突变类型、PIK3CA基因1种突变类型、以及含有结核分枝杆菌/肺炎链球菌/铜绿假单胞菌DNA的样本，经验证，上述样本与本产品均不产生交叉反应。干扰因素研究结果显示，临床FFPE样本可能存在的干扰物（酒精、福尔马林、石蜡、血红蛋白等，浓度分别为1%V/V、0.005%V/V、1%V/V、2g/L）均不干扰本试剂盒的检测结果。

针对核酸（DNA）提取纯化步骤，申请人采用临床样本，平行比较了2种核酸提取试剂盒的产量、纯度及DNA片段大小等各方面性能，根据与该产品的组合性能研究结果，确定了1种核酸提取试剂作为样本提取的推荐试剂盒。

在肿瘤组织细胞含量研究中，申请人对不同肿瘤细胞占比对检测结果的影响进行了研究。结果表明，肿瘤细胞占比10%以上的组织样本均可检出。结合临床样本的多样性和复杂性，建议组织样本肿瘤细胞占比≥20%。

（四）阳性判断值

申请人首先采用临床样本评估了各类基因变异的总体阳性判断值，然后对临床试验中收集的大量临床样本进行了每种基因变异的阳性判断值验证，最终确定了配套软件中的阳性判断值标准。

申请人先采用268例临床样本（相关基因变异情况均已经由已上市试剂盒/Sanger测序方法和/或其他平台NGS法验证），通过SPSS软件对ROC曲线进行分析，根据Youden指数最大值预估各类变异的总体阳性判断值。然后扩大样本量至463个，部分样本采用临床试验中收集的样本，进行每种基因变异的阳性判断值验证，其中包含EGFR基因G719位点28例、19外显子缺失51例、T790M21例、L858R40例和L861Q20例、KRAS基因G12位点30例和G13位点20例、BRAF基因V600E20例、HER2基因20外显子插入21例、ALK基因融合28例、ROS1基因融合21例，通过SPSS软件对ROC曲线进行分析，根据Youden指数最大值确定其阳性判断值。

通过上述实验，最终确定该产品使用配套软件进行数据分析时的阳性判断值为：突变比例大于等于0.6%。

（五）稳定性

申请人对该产品实时稳定性、冻融稳定性、运输稳定性进行研究，确定了在各种条件下本产品的有效保存时间。同时，对FFPE样本稳定性、核酸（DNA）溶液稳定性、文库稳定性进行了相关研究，确定了检测过程中各种样本类型的有效保存时间。

实时稳定性：采用三批次成品试剂盒（批号：20140715、20140720、20140725）储存于-20℃±5℃条件下（磁珠于2~8℃条件下保存），分别在0月、3月、6月、9月、10月、11月和12月对物理性能、阳性符合率、阴性符合率、检测限和重复性等进行考察，各项性能均符合要求，确定产品标示保存条件为-20±5℃（磁珠于2℃~8℃），有效期确定为10个月。

冻融稳定性：将三批次成品试剂盒（批号：20140715、20140720、20140725）反复冻融数次，分别在反复冻融第0、3、4、5、6、7次后对物理性能、阳性符合率、阴性符合率、检测限和重复性等进行考察，结果均无影响。为保证检测结果的稳定性，推荐使用过程中试剂尽量避免反复冻融，并且冻融次数不超过4次。

运输稳定性：将三批次成品试剂盒（批号：20140715、20140720、20140725）按照规定条件分别运往北京和广州再运回生产地址，分别在0月、3月、6月、9月、10月、11月、12月时对物理性能、阳性符合率、阴性符合率、检测限和重复性等进行考察，各项性能均符合要求。

申请人对石蜡样本稳定性、核酸（DNA）溶液稳定性、文库稳定性进行了研究。研究结果显示石蜡样本可在10℃-30℃条件下保存3年以上，核酸（DNA）溶液可在-20℃以下保存14个月以上，文库溶液可在-20℃以下保存40天以上。考虑到临床样本多样性，为保证结果稳定性，本产品说明书中规定石蜡样本年限不超过2年，提取的DNA保存时间不超过12个月，文库溶液保存时间不超过30天。

三、临床评价摘要

（一）与已上市试剂或金标准方法的比较研究

申请人在中国医学科学院附属肿瘤医院、南京医科大学第一附属医院(江苏省人民医院)、首都医科大学附属北京胸科医院共3家机构完成了本项研究。采用考核试剂与已上市产品或金标准方法比较研究试验的方法，验证本产品的临床性能。入组样本为960例非小细胞肺癌样本和46例良性组织干扰样本，共计1006例有效样本。样本类型为石蜡包埋组织。对比方法选择已上市产品或金标准方法：EGFR基因18-21外显子突变检测试剂盒（荧光PCR法）（注册证号：国械注准20163401512）、抗ALK（D5F3）兔单克隆抗体试剂（注册证号：国食药监械（进）字2014第3403115号）、人BRAF基因突变检测试剂盒（荧光PCR法）（注册证号：国食药监械（准）字2014第3401045号）、人KRAS基因突变检测试剂盒（荧光PCR法）（注册证号：国食药监械（准）字2013第3400175号）、VysisLSIROS1(Cen)SpectrumGreenProbe（AbbottLaboratories）荧光原位杂交、HER2基因20外显子Sanger测序。考核试剂与对比方法结果不一致的样本，采用Sanger测序进行序列测定。

本临床试验共检测出716例基因变异阳性样本，阳性率为71.17％（其中56例含有大于1种基因变异，占阳性样本数的7.82％），包括EGFR基因中203例19外显子缺失突变阳性、192例L858R突变阳性、41例T790M突变阳性、47例G719位点突变阳性及29例L861Q突变阳性；ALK基因中57例ALK基因融合阳性；ROS1基因中29例ROS1基因融合阳性；BRAF基因中25例V600E突变阳性；KRAS基因中97例G12位点突变阳性及20例G13位点突变阳性；HER2基因中32例20外显子插入突变阳性。

与对比方法的研究结果显示，考核试剂的定性检测结果阳性符合率为99.29%（95%CI98.36%-99.70%），阴性符合率为95.32%（95%CI92.30%-97.19%），总体符合率为98.11%（95%CI97.07%-98.79%），采用Kappa一致性检验进行统计学分析，K值为0.94，显示考核试剂与对比方法具有很高一致性。

考核试剂与对比方法结果不一致的样本共19例，主要分为两方面原因：（1）8例为考核试剂检测范围超过对比方法（2）11例可能为不同检测方法间的差异，其中3例为考核试剂检测HER220外显子插入阳性且突变比例已低于Sanger测序最低检测限；1例为对比方法免疫组化检测ALK基因融合阳性但无法显示具体融合形式；余下7例经Sanger测序验证，6例结果与考核试剂一致，1例结果与对比方法一致。

（二）与伴随诊断试剂的比较研究

1.EGFR基因与伴随诊断试剂的比较研究

申请人在中国医学科学院肿瘤医院及首都医科大学北京胸科医院2家临床机构开展与已上市或已充分联合药物临床评价的EGFR伴随诊断试剂的比较研究。针对EGFR基因19外显子缺失及L858R突变，已上市伴随诊断试剂选用EGFR基因突变检测试剂盒（等位基因特异扩增荧光PCR法）（国食药监械（进）字2014第3403340号）；针对EGFR基因T790M突变，选用CobasEGFRMutationTestV2。

入组样本为比较研究（一）中已入组及部分新入组样本，共入组323例NSCLCFFPE组织样本。研究结果显示，考核试剂检测EGFR基因突变阳性239例，包含19外显子缺失突变124例及L858R突变115例；其中56例同时检测到T790M突变。经统计分析，EGFR基因19外显子缺失的阳性符合率为100.00％(95%CI97.00%-100.00%)，阴性符合率为100.00％(95%     CI98.13%   -100.00%)，总体符合率为100.00％(95%CI98.84%-100.00%)；L858R突变的阳性符合率为100.00％(95%CI96.77%-100.00%)，阴性符合率为100.00％(95%CI98.21%-100.00%)，总体符合率为100.00％(95%CI98.84%-100.00%)；T790M突变的阳性符合率为100.00％(95%CI93.58%-100.00%)，阴性符合率为100.00％(95%CI98.60%-100.00%)，总体符合率为100.00％(95%CI98.84%-100.00%)。考核试剂检测EGFR基因的阳性符合率为100.00％(95%CI98.42%-100.00%)，阴性符合率为100.00％(95%CI95.77%-100.00%)，总体符合率为100.00％(95%CI98.84%-100.00%)，采用Kappa一致性检验进行统计学分析，K值为1，显示二者具有很高一致性。

2.ALK基因与伴随诊断试剂的比较研究

对中国医学科学院附属肿瘤医院、南京医科大学第一附属医院（江苏省人民医院）、首都医科大学附属北京胸科医院共3家机构的（一）比较研究中入组样本，均进行已上市的免疫组化法伴随诊断试剂“抗ALK（D5F3）兔单克隆抗体试剂（国食药监械（进）字2014第3403115号）”的检测。

共检测1006例NSCLCFFPE组织样本。研究结果显示，考核试剂检测ALK基因融合阳性57例，阳性符合率为99.28％(95%CI90.86%-99.70%)，阴性符合率为100.00％(95%CI99.60%-100.00%)，总体符合率为99.90%(95%CI99.44%-99.98%)，采用Kappa一致性检验进行统计学分析，K值为0.99，显示二者具有很高一致性。1例不一致样本为考核试剂检测结果阴性，伴随诊断试剂阳性。

3.ROS1基因与伴随诊断试剂的比较研究

在中国医学科学院肿瘤医院及首都医科大学北京胸科医院2家临床机构开展。针对ROS1基因融合，选用已充分联合药物临床评价的人类ROS1基因融合检测试剂盒（荧光PCR法）（国食药监械（准）字2014第3401514号）。

入组样本为（一）比较研究中已入组及部分新入组样本，共入组323例NSCLCFFPE组织样本。研究结果显示，考核试剂检测ROS1基因融合阳性37例，阳性符合率为100.00％(95%CI90.60%-100.00%)，阴性符合率为100.00％(95%CI98.69%-100.00%)，总体符合率为100.00％(95%CI98.84%-100.00%)，采用Kappa一致性检验进行统计学分析，K值为1，显示二者具有很高一致性。

（三）TKI药物疗效相关的回顾性临床研究

申请人在“与伴随诊断试剂的比较研究”中已验证为相关基因变异阳性的晚期NSCLC病例中，进行了相关靶向药物治疗的回顾性疗效分析研究，共入组有效病例118例，其中吉非替尼片23例、盐酸埃克替尼片30例、甲磺酸奥西替尼片20例、克唑替尼胶囊40例、盐酸厄洛替尼片5例。

申请人对经伴随诊断试剂验证为EGFR基因19外显子缺失或L858R突变阳性的病例中进行了吉非替尼片治疗的回顾性疗效分析，纳入23例晚期NSCLC有效病例，其中15例临床评估部分缓解，7例评估疾病稳定，1例评估疾病进展，临床用药客观缓解率为65.22%（95%CI44.89%－81.19%）、疾病控制率为95.65%（95%CI79.01%－99.23%），与既往药物临床试验客观缓解率范围基本相符。且受试者经考核试剂检测结果均为EGFR敏感突变（19外显子缺失或L858R）阳性，与临床既往分子检测结果一致。

申请人对经伴随诊断试剂验证为EGFR基因19外显子缺失或L858R突变阳性的病例中进行了盐酸埃克替尼片治疗的回顾性疗效分析，纳入30例晚期NSCLC有效病例，其中19例临床评估部分缓解，10例评估疾病稳定，1例评估疾病进展，临床用药客观缓解率为63.33%（95%CI45.51%－78.13%），疾病控制率为96.67%（95%CI83.33%－99.41%），与既往药物临床试验客观缓解率范围基本相符。且受试者经考核试剂检测结果均为EGFR敏感突变（19外显子缺失或L858R）阳性，与临床既往分子检测结果一致。

申请人对经伴随诊断试剂验证为EGFR基因T790M突变阳性的病例中进行了甲磺酸奥希替尼片治疗的回顾性疗效分析，纳入20例晚期NSCLC有效病例，其中14例床评估部分缓解，4例评估疾病稳定，2例评估疾病进展，临床用药客观缓解率为70.00%（95%CI48.10%－85.45%），疾病控制率为90.00%（95%CI69.90%－97.22%），与既往药物临床试验客观缓解率范围基本相符。且受试者经考核试剂检测结果均为EGFRT790M突变阳性，与临床既往分子检测结果一致。

申请人对经伴随诊断试剂验证为ALK基因融合阳性的病例中进行了克唑替尼胶囊治疗的回顾性疗效分析，纳入22例晚期NSCLC有效病例，其中16例临床评估部分缓解，6例评估疾病稳定，临床用药客观缓解率为72.73%（95%CI51.85%－86.85%），疾病控制率为100.00%（95%CI85.14%－100.00%），与既往药物临床试验客观缓解率范围基本相符。且受试者用药前样本经考核试剂检测结果均为ALK基因融合阳性，与临床既往分子检测结果一致。

申请人对经伴随诊断试剂验证为ROS1基因融合阳性的病例中进行了克唑替尼胶囊治疗的回顾性疗效分析，纳入18例晚期NSCLC有效病例，其中13例临床评估部分缓解，3例评估疾病稳定，2例评估疾病进展，客观缓解率为72.22%（95%CI49.13%－87.50%），疾病控制率为88.89%（95%CI67.20%－96.90%），与既往药物临床试验客观缓解率范围基本相符。且受试者用药前样本经考核试剂检测结果均为ROS1基因融合阳性，与临床既往分子检测结果一致。

申请人对经伴随诊断试剂验证为EGFR基因19外显子缺失或L858R突变阳性的病例中进行了盐酸厄洛替尼片治疗的回顾性疗效分析，纳入5例晚期NSCLC有效病例，其中3例临床评估部分缓解，2例评估疾病稳定，临床用药客观缓解率为60.00%（95%CI23.07%－88.24%），疾病控制率为100.00%（95%CI56.56%－100.00%）。且受试者经考核试剂检测结果均为EGFR敏感突变（19外显子缺失或L858R）阳性，与临床既往分子检测结果一致。但因该部分有效样本量未达到预期统计学要求，未能进行具有统计学意义的临床研究分析，故本次临床研究中未明确盐酸厄洛替尼片与本产品伴随关系。

综上所述，该产品临床试验资料对产品的临床性能进行了较全面研究，临床试验符合要求。

四、风险分析及说明书提示

（一）收益评估

肺癌是世界范围内发病率较高的肿瘤之一，主要分为非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC），其中NSCLC占80%以上。目前，针对NSCLC驱动基因突变设计的多种靶向药物已在多个大型临床试验中获得较好效果，其中一些药物已获批在临床上使用，很大程度上提高NSCLC患者的生存收益。基于高通量测序的多基因联合检测试剂盒可一次性检测多种基因变异，并且实现更高的检测灵敏度。

在临床研究中，该产品的检测性能与已上市试剂或金标准方法及伴随诊断试剂相比，均具有良好一致性；该产品检测相关基因变异阳性的晚期NSCLC病例，用药后客观缓解率达到预期临床疗效，显示该产品可以帮助NSCLC患者选择肿瘤靶向治疗方式。

（二）风险评估

1.检测结果存在假阴性及假阳性的风险

该产品为基于高通量测序的多基因体外诊断产品，检测过程主要包括核酸（DNA）提取纯化、文库制备、探针杂交捕获、高通量测序及生物信息学分析等多个步骤，检测结果可能受到实验过程中多种因素的影响。

样本的来源、采集过程、样本质量及核酸提取质量等因素均可能影响检测的准确性，从而导至假阴性或假阳性的检测结果。在产品研发阶段，对配套的核酸提取试剂进行了验证，并设定了质控标准。在样本收集及核酸提取过程中须使用产品说明书中推荐的配套试剂，并严格按照质量标准进行核酸质控。

测序前实验操作、测序仪及数据分析软件等因素也可能对检测结果的准确性造成影响。为确保检测质量，在产品研发阶段对各步骤产物质量确定了质控标准，对配套的MiSeqDX基因测序仪（见说明书）也进行了验证，并且配套开发了测序数据分析及结果判读的生物信息分析软件。在检测过程中须严格按照质量标准进行质控，并使用该产品说明书中推荐的配套试剂、仪器及软件进行检测和数据分析，本产品尚未对其他配套测序仪及软件进行验证。

使用者须了解检测过程中可能存在的潜在风险及检测的局限性。不符合说明书中【样本要求】的样本和不恰当的实验操作会导至假阴性或假阳性结果，请严格按照产品说明书中【样本要求】及【检验方法】的要求操作和进行实验过程质控。同时，由于肿瘤组织可能存在较大异质性，不同部位取样可能会得到不同的检验结果。

此外，实验环境同样可能影响检测结果。该产品在检测过程中涉及PCR扩增，操作过程中气溶胶泄露也可能会导至实验室污染。因此请在可控的基因扩增实验室环境进行检测操作，区分试剂准备区、样本制备区、PCR扩增区及上样测序区。并需根据《医疗机构临床基因扩增管理办法》对操作人员进行专业培训，非专业的操作及操作不当可能会影响检测质量。

该产品阴性检测结果不能完全排除基因突变的存在。导至检测结果假阴性的原因可能包括：肿瘤样本中肿瘤细胞较少、肿瘤组织异质性、基因突变类型不在试剂盒检测范围内、突变比例低于试剂盒最低检测限、样本降解、样本污染、样本中存在过量干扰物质、不正确的样本保存、不正确的试剂盒保存、试剂盒过期、不恰当的实验操作等等。

2．检测试剂的安全性风险

检测流程中涉及到的配套试剂盒含氢氧化钠，具有刺激性及腐蚀性，吸入或接触可能对鼻黏膜、呼吸道及皮肤等造成灼伤；二甲基亚砜（DMSO）可能造成恶心、呕吐、皮肤灼伤反应等。实际操作过程中应注意穿戴保护性服装及安全操作，以降低实验风险。

（三）产品尚待完善的性能

该产品尚有多个未经伴随诊断验证的基因突变类型，需要在产品上市后继续收集药物疗效相关信息。

（四）收益—风险的确定

通过对环境的严格监测、对生产过程的严格监控、在产品说明书中给出详细的操作流程和注意事项、对实验人员进行专业培训及安全培训等防范措施可以对该产品的已知和可预见的风险进行控制和降低，剩余风险可以被控制在可接受范围内，同时没有带来新的危害与安全风险。在目前认知水平上，认为该产品带来的获益/收益大于风险。

尽管目前认为该产品的获益/收益大于风险，但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的防控，已在产品说明书中提示以下信息：

1.适用范围：本试剂盒用于定性检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者经福尔马林固定的石蜡包埋（FFPE）组织样本中EGFR、ALK、ROS1、BRAF、KRAS、HER2基因的多种变异。其中，EGFR基因19外显子缺失及L858R点突变用于吉非替尼片及盐酸埃克替尼片的伴随诊断检测，T790M点突变用于甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断检测；ALK基因融合和ROS1基因融合用于克唑替尼胶囊的伴随诊断检测。该产品检测范围内的其他基因突变均未与靶向药物进行过安全性和有效性的联合临床试验评估，仅进行了性能验证，因此不能用于伴随诊断检测。

2.警示及注意事项：产品说明书中介绍了该产品检验方法的局限性及使用中的注意事项。

本申报项目为境内第三类医疗器械产品注册，属于创新审批项目（编号：201700001）。申请人的注册申报资料符合现行要求，依据《医疗器械监督管理条例》（国务院令第680号）、《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令2014年第5号）等相关医疗器械法规与配套规章，经系统评价后，建议准予注册。申请人在该产品上市后应继续对产品伴随诊断用途进行验证。请在至少两家临床机构随访收集伴随诊断4种药物（吉非替尼、埃克替尼、克唑替尼、奥希替尼）的临床用药疗效随访数据，作为临床补充资料在产品下一次延续注册时提交。临床用药疗效随访数据应包括：病理诊断信息，应用本产品检测信息，患者用药疗效终点至最佳疗效的疗效数据，每种药物相关数据应满足统计学意义。该项临床资料应由出具数据的各临床试验机构签章。