作者：IVD章北海 据头豹研究院的数据显示，2024年国内分子诊断总体市场规模已经达到277亿，增速24%，分子检测是当前IVD细分领域增速最高的市场。 随着病原体检测市场的不断扩容，分子诊断市场在自动化，快速检测两个方面取得了跨越式的发展。分子诊断从过去的环节自动化进化到全流程自动化，检测时间从2-3个小时缩短到30分钟左右。自动化、全流程化、快速检测、正是当下分子诊断试剂的发展趋势。 目前市面上的分子检测产品，大多数都是经典的PCR检测产品，检测系统复杂，设备成本过高，限制了其在基层单位和现场环境的使用。 恒温核酸检测无需升降温，检测设备相比PCR便宜、简单、使用场景更为广泛，一直在农业，畜牧业，宠物检测等多个应用领域广受欢迎。但是恒温扩增的特异性一直被行业诟病。一个技术的发展和应用，往往不是恒速发展，而是跳跃式的。 2012年，CRISPR基因编辑技术面世，恒温检测迎来真正被大规模应用的机会。 早期的恒温检测技术由于技术本身的限制，容易出现假阳性。CRISPR技术横空出世之后，业内尝试采用恒温扩增方法进行预扩增+CRISPR切割放大的方法提升检测体系的灵敏度和特异性。没想到，结果出乎意料的好，检测灵敏度甚至到了单拷贝级别。 目前应用广泛的分子预扩增体系，包含聚合酶链反应（PCR）、环介导等温扩增（LAMP）、重组酶聚合酶扩增（RPA）、核酸依赖扩增技术（NASBA）、链置换扩增（SDA）和指数扩增反应（EXPAR）等。 下表中罗列了部分已报道的CRISPR检测与不同预扩增方式联用的相关参数及灵敏度。 鉴于预扩增+CRISPR检测体系在使用应用场景中展现出的高灵敏度和特异度，以及恒温系统在检测方面的低成本，易普及，好操作的特点，国际大厂纷纷布局相关的恒温检测专利和应用。可以预见的是，未来分子病原体检测，恒温扩增+CRISPR必有一席之地。 体外诊断一哥，罗氏，也已经布局CRIPSR，就其最新公布的专利WO2025036740A1，可以看到将PCR与CRISPR组合起来后，实现了单个DNA分子的超高灵敏度检测。 在应用端，也已经有公司在积极布局。FDA近期授予分子诊断公司intellliGenome的CRISPR-TB血液检测系统“突破性医疗器械认定“，它可通过人血清或者EDTA血浆样本中的cfDNA检测结核分歧杆菌。该检测系统单台设备成本700美金，单次检测成本为2.7美金，结核检测的灵敏度高达81%，比X-PERT 68%的检测灵敏度高出13个百分点，更是远远高于结核培养55%的灵敏度，同时特异性达到94%，已经达到WHO关于非痰液样本TPP的质量标准，在实际的临床检测中，显示出极高的应用价值。 恒温检测系统在CRISPR的加持之下，同时具备了高灵敏度，高特异性，设备和试剂成本低廉，检测时间快等多项优点。因此，未来的病原体核酸检测市场，PCR一定会受到恒温+CRISPR的强烈冲击。 国内目前在恒温+CRISPR应用布局的厂家相对较少，伯杰医疗是其中最为知名的一家。早在2021年，伯杰医疗就已获批国内首个RPA+CRISPR双技术平台NOVA-X8检测系统。 X-8采用经典的磁珠法进行核酸提取，RPA+CRISPR的双系统进行核酸信号的放大和处理，具有超高检测灵敏度和特异性。根据报道，X8平台的新冠检测试剂临床灵敏度为97.77%，临床特异性为100.00%，总体符合率达到了98.89%。 这还仅仅是四年前的初代试剂，现在又过去这么久了。很难想象恒温+CRISPR已经到什么阶段了。 恒温扩增试剂上下游产业链已逐步成熟，随着未来恒温扩增核心专利的过期，恒温检测+CRISPR一定会在更多领域展现得天独厚的优势。快速，灵敏，特异，耗时短，便宜，兼容后端多种判读方式，多重优势集一身。 在现场检测，大规模筛查，偏远地区检测，国际欠发达地区的病原体检测上，其应用优势非常突出。从使用场景的可能性来判断，恒温+CRISPR的应用占比将会远超PCR。 参考文献： 1、KAMINSKI M M, ABUDAYYEH O O, GOOTENBERG J S, et al. CRISPR-based diagnostics [J]. Nat Med, 24(6): 702. 2、Sci. Transl. Med.17,eadp6411(2025).DOI:10.1126/scitranslmed.adp6411
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