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还在纠结怀疑恒温扩增技术?别落伍了!

2023-7-20 09:54| 编辑: mango524| 查看: 1280| 评论: 0|来源: IVD工具人

摘要: 恒温扩增技术相较于PCR无需变温,在扩增效率、设备要求等方面有着明显优势。


核酸检测是病原体检测的金标准,qPCR是核酸检测最常见的使用方法,然而大范围的筛查,对于检测时间又提出了新的要求。恒温扩增技术相较于PCR无需变温,在扩增效率、设备要求等方面有着明显优势。
面对成熟的传统技术,有不少科研人员在担忧怀疑恒温扩增技术的检测限灵敏度,处于观望徘徊状态。但目前已有多家企业使用安普未来生物的多酶恒温快速核酸扩增技术MIRA,获得三类医疗器械注册证,恒温扩增的市场在日益扩大。
CRISPR检测技术市场应用前景较好,在于它不仅能够检测各种病原体,甚至在基因突变、定点突变检测方向也发挥极大作用。其优势突出,更容易与恒温检测技术RPA、MIRA等结合,既能提升特异性又能发挥恒温技术的特有优势,检测耗时短、反应迅速、 灵敏度高,且要求的检测设备较低又能降低检测成本。
中国人民解放军疾病预防控制中心宋宏彬主任的课题组在《JOURNAL OF MEDICAL VIROLOGY》期刊上发表文章《Highly sensitive and rapid detection of SARS-CoV-2 via a portable CRISPR-Cas13a-based lateral flow assay》,影响因子20.693。


文章中用到的关键技术就是MIRA与CRISPR,经过巧妙的设计实现了双重靶标的试纸条检测


研究中使用恒温扩增技术MIRA结合CRISPR免疫层析双重检测。人内参基因的检测以内参对照,以保证样本采集、储存、转移、和核酸提取的有效性。

MIRA结合CRISPR免疫层析双重检测方法的检测限、特异性评价:

检测限:0.25copies/uL,与其他8种人冠状病毒检测特异性较好均无交叉反应。


MIRA结合CRISPR荧光检测方法的检测限、特异性评价:

检测限:0.25copies/uL,与其他8种人冠状病毒检测特异性较好均无交叉反应。


由于该方法的高灵敏度,可有助于早期筛查感染个体。该研究为MIRA结合CRISPR检测提供了一个强大的可视化工具,可以显著提高现场检测SARS-CoV-2的可靠性,作为临床检测具有巨大的应用价值。
  • 灵敏度高:该研究基于MIRA扩增技术建立的CRISPR-LFA方法显示LoD为0.25copies/μl,检测限突破我国市售病原核酸检测试剂盒的LoD限制1 copies/μl,与RT-PCR方法相当。
  • 快速高效:CRISPR免疫层析法可在1小时内报告检测结果,因此与RT-PCR相比,可节省30分钟至1小时;
  • 检测成本低:CRISPR免疫层析方法需要最少的仪器,可以提供37-42°C的恒温,从而节省与昂贵仪器相关的成本。

(原文链接:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/jmv.28096)

对病毒、真菌、细菌、微生物等的检测中,靶标核酸经等温扩增技术富集,扩增产物与Cas蛋白结合,激活Cas蛋白切割报告探针,放大检测信号。由于这一特点,现在有不少科研老师对该研究方法很感兴趣。
安普未来生物联合海微生物,将于7月25日周二20:00推出线上直播——《恒温扩增与CRISPR结合的技术应用与分享》。直播将着重介绍多酶恒温核酸扩增技术MIRA与CRISPR-Cas12a、cas13a,从应用场景、技术原理、以及两者技术结合如何引物设计、体系配制,到科研文章案例(HPV多靶标分型检测、胶体金试纸条型现场快速检测应用等),为科研老师展开详细的介绍。


安普未来(常州)生物科技有限公司

公司团队历经十多年的技术沉淀,开发出代表未来生物检测技术趋势的多酶恒温快速扩增技术MIRA,并以MIRA为核心平台技术研发出“超快速核酸释放技术”、“双通道恒温荧光检测仪”、“一体化全自动封闭检测系统”、“自测型核酸检测装置”等一系列配套产品,并计划启动“微流控芯片技术”“小型自动化检测系统”等多方面的新型产品,力求打造出快速分子检测领域的整体解决方案,将MIRA技术的灵敏度高、特异性强、快速简便、污染风险小、现场作业等特点充分体现出来。

(MIRA技术原理与特点)


深圳市海微生物科技有限公司

公司成立于2021年11月,是国内知名体外诊断企业海普洛斯生物科技有限公司成立的专注于感染性疾病病原体体外诊断企业。目前感染性疾病的最大痛点是由于精准诊断的产品/技术不足导至诊断滞后和抗生素滥用。海微生物以精准诊断产品研发为使命和愿景,专注于感染性疾病诊断方法研发、生产与推广,致力于让高质量的精准诊断产品服务临床,为患者减少30%的医疗成本,让患者快速康复,重享健康快乐生活。

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