这三年，一个很好的话题。 有人凤凰涅槃，有人点石成金，但更多是负重前行，不敢轻言放弃。 就笔者兴趣所在，梳理三年在流式界的耳闻目睹。疏漏在所难免，非图看官一笑，读者各取所需。 （本文有4个编号原创表，2个编号原创图，引用需注明出处。）
表1总结了这三年（红色）以及上溯若干年的流式重要收购，忽略了收购后没有延续的业务。2021年4月，DiaSorin公司宣布以18亿美元收购Luminex。Luminex是“流式荧光”技术的代名词，也曾在2018年收购Millipore Sigma旗下的Amnis成像流式和Guava毛细管流式细胞仪。这桩交易令人关注的点在于，流式荧光和化学发光以怎样一种态势共处，是竞争，是互补？要知道，前者自上个世纪90年代推出后，被化学发光大品牌认为是自嗨，被流式主流从业者认为是小众，各种教材书籍倒是屡见不鲜，小而弥坚，到底其多参数的意义如何呈现？在Luminex这一领头企业被化学发光全球二线头品牌看中后，会迎来技术绽放的春天吗？
（在笔者发稿前一刻，纳市上市企业Cytek宣布收购Luminex流式荧光外的仪器业务，对Amnis和Guava这两个命运多舛的品牌来说，可能是一个最好的归宿。） 2021年7月，PerkinElmer公司宣布以52.5亿美元现金和股票组合的方式收购BioLegend，后者在流式试剂领域绝对数一数二，试剂品种过万。 从体量上归纳收购，无非是10+1，或者1+1。后者以1+1>2为结果的概率更高，而被体量数倍甚至数十倍，数百倍的企业收购，要么继续孤芳自赏，要不淹没于茫茫瀚海.....举个例子，1968年第一台商品流式细胞仪的生产公司现在销售额有多大？（纯属个人观念，请勿拍砖。） HOWARD老爷子书中有“Big Three”的说法，早期是：BD，Coulter，Ortho，后来是BD Biosciences，Beckman Couluter ，DakoCytomation。今天是会有新的三巨头，还是BC，BD，Thermo，PE，Agilent，Cytek并驾齐驱，国内必达科系，迈唯层指等能否脱颖而出，让我们拭目以待。 表1 流式界收购大事记 公司
| 收购
| BD
| 2022-Cytognos：血液流式试剂，EuroFlow联盟许可检测方法 2017-FlowJo：软件 2012-Sirigen：高分子染料，Brilliant Violet系列来自于此 2011-Accuri：小型分析流式 1997-Pharmingen：流式试剂 | Beckman Coulter | 2019-Cytobank：在线流式数据分析网站 2014-苏州赛景：流式仪器 2013-ReaMetrix：干粉流式试剂 2007-Dako：MoFlo分选、CyAn分析流式 （1995年库尔特公司收购Immunotech， 1998年贝克曼库尔特公司成立） | Thermo Fisher | 2021-Propel Labs：全光谱流式细胞分选仪 2020-Phitonex：NovaFlour流式荧光染料和700多种流式抗体 2016-Affymetrix（2012年收购eBioscience，eFluor/SuperBright来自后者） 2003-Molecular Probe: Alex Flour/Pacific Blue/SYBR来自于此 | PerkinElmer
| 2021-Biolegend：过万种流式试剂，Fire，Spark，iFlour等是其品牌 | Agilent
| 2018-杭州艾森：流式仪器 2012-Dako：临床检验用抗体 | Cytek
| 2023-DiaSorin：流式细胞仪和成像业务 2021-Tonbo：900余种流式试剂
| Abcom
| 2021-BioVision：抗体等 2012-Epitomics：兔抗 | | BioMérieux | 2011-CHEMUNEX：微生物快速检测流式 | Bio-Techne
| 2022-Namocell：微流控分选 2014-Novus：抗体 1985-R&D：抗体 (由Techne改名而来) | DiaSorin
| 2021-Luminex：流式荧光，Amnis成像流式，Guava毛细管流式 （2018年Luminex收购Merck的Amnis和Guava，2011年Merck收购Amnis，2009年Merck收购Guava） | Medix
| 2021-DiaClone：300余种流式相关产品
| | Sartorius | 2016-IntelliCyt：流式 | Standard BioTools | 2014-DVS Sciences：质谱流式 (由Fluidigm改名而来) | Sony
| 2010-iCyt Mission Technology：分选流式
| | Sysemex | 2013-Partec：流式仪器和试剂
|
临床玩家日益增多 2014年以前，国内临床流式市场完全是国外品牌的天下，并且仅仅是BC & BD。 而在今天已经有19家公司流式细胞仪经NMPA注册批准，其注册机器最高配置、TBNK试剂盒、细胞因子联检等配套情况见下表（绿色表示有）： 表2 NMPA注册流式细胞仪及临床试剂配套* （1-4）
| Agilent | BC | BD | 必达科** | 机器最高配置
| 25C-4L | 13C-3L
| 12C-3L | 6C-2L
| TBNK试剂盒
| 有6色 |
| 有6色
| 有6色 | HLA-B27
|
|
|
| / | 荧光单抗
|
|
|
|
| 联检细胞因子
| 备案
| /
| /
| 有注册
| | （5-8） | 迈瑞 | 唯公生物
| 层浪生物
| 指真生物 | | 机器最高配置 | 6C-2L | 6C-2L | 14C-3L | 8C-2L | | TBNK试剂盒 |
| / | / | / | | HLA-B27 |
| / | / | / | | 荧光单抗 | /
|
| 少
| 少
| | 联检细胞因子 | /
| 有注册
| /
| 备案 | | （9-12） | 瑞斯凯尔 | 赛雷纳 | 微米生物
| 泛肽生物 | | 机器最高配置 | 6C-2L | 8C-2L | 6C-2L
| 6C-2L | | 荧光单抗 | 少
| 少
|
|
| | 联检细胞因子 | 有注册 | 备案
| 备案 | 备案 | | （13-16） | 厦泰
| 优利特
| 中科瑞正 | Sysmex | | 机器最高配置 | 38C-3L
| 8C-2L |
|
| | 荧光单抗 |
|
|
| 仅CD4
| | （17-19） | 博奥新景 | 中生苏州
| 中研长春
|
| | 机器最高配置 | 6C-2L | 5C-1L
|
|
|
*C和L分别表示荧光通道和激光器，前面数字表示数量**2020年9月，新三板企业旷博生物（835093）公告，必达科成为公司控股股东临床流式更多玩家的加入，首先要得益于国家食品药品监督管理总局通告2017年第226号《食品药品监管总局关于过敏原类、流式细胞仪配套用、免疫组化和原位杂交类体外诊断试剂产品属性及类别调整的通告》，许多抗体归为一类管理。 在NMPA有较多备案抗体的公司，集中如下： 贝克曼库尔特 | | 同生时代 | 安捷伦 | 四正柏 | 杭州联科 | 达科为 | 河南凯普瑞 | 天津美瑞特 | 正熙生物 | 微米生物 | 广州达泰 | 厦泰 | 泛肽生物 | 优利特 | 中科瑞正 | 赛基生物 | 天津三箭 |
|
|
从仪器来看，六色荧光成为临床实验室流式基本配置，安捷伦、贝克曼库尔特、BD、层浪生物还升级或新推出了10色以上机器，聚焦全光谱流式的厦泰则有3激光38色的注册机器。 但是，从配套注册及备案试剂来看，10色以上应用还在无票乘车阶段。CD19、CD20、CD22、CD34、CD138等单抗及检测试剂盒等，需要注册，还是只有四家公司。 表3 NMPA流式注册（备案)试剂标记荧光染料 激发光
| BD
| Beckman Coulter | | 蓝 | FITC（518nm）
| PE（578nm）
|
| ECD（613nm） | PerCP（675nm）
| PC5（670nm） | | PC5.5（695nm） | | PC7（767nm） | | 红 | APC（660nm）
|
| APC-A700（723nm） | APC-Cy7（767nm） APC-H7（765nm） | APC-A750（775nm） | 紫
| BV421（423nm） |
| V450（448nm） | PB（455nm） | | V500-C（500nm） |
|
| KRO（530nm） | | BV605（603nm） |
|
这三年，新的应用推出不多，这是临床流式从业者需要关注的核心。 湖南湘奕注册了含线粒体染料Mito，以及初始T细胞表达CD45RA、CD62L的两个试剂盒，值得特别指出。市场推广效果如何不知，但至今资料罕见，也是奇事一件。 人群结核分枝杆菌感染率23%，但只有5%~10%的人会由潜伏性结核感染者转变为活动性结核，结核感染免疫检测有QIAGEN，PE(收购T-spot）以及国内20多个品牌，参与者众。外周血CD161检测据信能辅助诊断活动性结核，深圳联合医学有备案试剂。这是笔者特别感兴趣的方向。 CD64主要表达于巨噬细胞、单核细胞及树突状细胞表面，中性粒细胞和淋巴细胞表面几乎不表达CD64。当机体患感染性疾病时，中性粒细胞表面CD64表达迅速升高，淋巴细胞仍几乎不表达。 一般情况下，机体感染或内毒素入侵时，CD64在刺激后4～6h即可升高。与白细胞计数、C反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)比较，CD64在诊断感染性疾病中具有更高的敏感性和特异性。当下CD64之推广需要统一指标。 其它关注方向还包括（都是试剂盒，任重道远）：
临床流式归根结底还是试剂和应用的竞争比拼。自主抗体，荧光标记和专家背书三者缺一不可。免疫力是疾病发作发展的根源，流式大有可为。
多色分析试剂短板 多色分析一直是流式“军备竞赛”的核心内容。不管是传统流式的单激光多色和多激光；还是光谱流式与质谱流式，本质上都是为了增加同时分析的参数数量。 传统流式：目前最高配置是48个荧光检测器。2019年在Front.Immunol.发表了一篇29色文章，紫外光激发7色，紫光激发8色，蓝光激发6色，561nm激光激发5色，红光激发3色。 光谱流式：荧光检测器从55个到184个。目前检索，最多色文章都是采用Cytek机器发表在Cytometry A上的文章，先有一篇Cytek员工自己做的40色，卡塔尔Hamad医疗集团其后发表了一篇43色文章。 质谱流式：理论上都是135个通道，目前实现了47参数方案。
图1是流式多参数分析（不包括散射及其它参数）的仪器现状。不看参数，看表现，对于流式厂家来说，突破29，43，47三个数字，比简单比较更香。 当然，可能首先要回答的一个问题是多参数的意义究竟有多大，一次分析43参数比58参数分两管好在哪里？ 
多色分析的关键不仅仅在检测器配置，以及数据处理能力。就目前而言，瓶颈还是在配套的荧光染料；对质谱而言，是同位素标记抗体。 我们从Cytek 卡塔尔43色谈开去，以下方案采用18种BD Horizon Brilliant染料，特别为紫外和紫光激发提供了最多选择；方案采用3种Biotium公司的CF染料，该公司提供超过30种CF染料，特别是红光和近红外激发，选择较多。Cytek公司自己的cFlour染料，在蓝光、黄绿光和红光激发上有更多选择。 荧光染料值得再写一文，这里不再赘述。但呼吁厂家不要盲目比较多色，自己先做出来有意义的结果发表再谈。这里的有意义不是纯粹技术上的，而是应用上的。 
流式荧光新机出现 
流式免疫荧光，又称液相芯片、悬浮阵列。相比化学发光，其最大优势是同时实现多参数检测，这是通过荧光编码微球来实现的。 Luminex流式荧光检测技术的核心为荧光编码微球，技术上采用不同荧光染料的配比。1999年推出，2007年新产品号称可以同时对1个样本中的500种不同目的分子进行检测，并且可以一次检测384个不同样本。上海透景、Bio-Techne、ThermoFisher等68家商业许可签约伙伴（38家诊断，30家科研），在使用Luminex-100/200或xMAP等相关技术平台。 中翰盛泰编码微球采用微米级球表面共价结合纳米级球的方式，微米球和纳米球分别有10种不同荧光染料浓度，微米球还可以加入不同大小。此编码模式获得更大的比表面积，更小的空间位阻。 在笔者看来，流式荧光技术未能取得与化学发光一样普及的根本原因，不在技术垄断，而在：1）应用没有更新，能做的活化学发光都能做；2）化学发光不强调一管多参数，但可以多参数分管检测；3）操作方便性。 目前流式荧光最瞩目的应用是细胞因子，这是这三年临床流式取得较快发展的第二个原因。根据法规规定，试剂盒需要注册，旷博、唯公、瑞斯凯尔、重庆博生特、赛基、湖南拜恩美等6家公司走在前面。 细胞因子的应用应当不局限于Th1/Th2/Th17等6因子，7因子乃至12因子检测。这三年，比较重要的进展在于 首款炎症因子四联检试剂盒； 肿瘤免疫评估六因子联检； 趋化因子联检，免疫细胞诱导剂的监测。
目前主要的商品流式分选仪见下表。 这三年，分选流式的发展呈现了这样几个趋势： 减少对细胞损伤，许多公司采用微流控芯片，低压分选等； 光谱分选仪，如BD公司的FACSDiscover S8，Thermofisher公司的BigFoot，Cytek公司的Aurora CS的光谱分选仪； 实时成像，如BD公司的FACSDiscover S8 和Union Biometrica的COPAS Vision ； 细胞拉曼散射，无需标记，如国内星赛生物公司的FlowRACS；
拉曼光谱流式
笔者建议的方向有二：1）把流式分析做到极致，如Beckman Coulter公司2020年12月发布CytoFlex SRT，分选出来的细胞就是有价值的； 2）把分选踏踏实实作为一个故事的终点，另一个故事的起点。花这么多钱买台分选，是为了把分选出来的细胞干出别的活来，比如最近十分热门的单细胞测序，能否在分选那一刻就考虑到测序的需要？ 商品流式细胞仪是从分选仪开始，希望分选流式“以终为始”，真正成为流式皇冠上的明珠。 公司
| 型号
| 分选参数和其它特点
| BC
| Moflo Astrios EQ | 32C-7L，空气激发，6路 有效分选速度＞70,000 EPS | | CytoFLEX SRT | 15C-4L | BD
| FACSDiscover S8 | 全光谱+图像，5激光，6路
| FACSymphony S6
| 28C-9L，6路 | FASCAria Fusion
| 18C-5L
| FACSAria III
| 18C-4L
| FACSMeoldy
| 9C-3L
| | Bio-Rad | S3e | 4C | Cytek
| Aurora CS
| 全光谱-5L，6路 | Cytonome
| Viva | 研究型
| Hydris
| 大规模细胞生产
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