核酸检测荧光定量的Ct值——爱恨交加的参数

对于常规的实时荧光定量PCR（QPCR）分析仪器/系统，Ct值的获取及被广泛用于病原体的检测应用，大家已经非常熟悉。随着行业的发展和技术的进步，QPCR仪器设备及试剂遇到了机遇和挑战。亿欧智库（2021年中国基因检测行业研究报告：技术篇）分析我国QPCR行业内的企业大多面临着基于技术的共性问题。针对这些问题，解决方案则主要分为加速技术提升与布局新技术两种。

QPCR分子诊断的POCT作为行业发展方向之一，性能的提升是加速技术应用的重要因素。对于QPCR单样本通量的POCT设备，单个反应的关键参数Ct值在研发中如何优化？同台设备，同一反应体系，在同样模板浓度情况下，理论上单个反应的Ct值越大，说明反应中酶的效率越低。

酶反应效率的提升和Ct值优化的过程，可先分析典型的40个PCR循环荧光定量扩增曲线。下图中扩增曲线分为荧光背景期、指数扩增期、线性期、平台期。为了达到较低的荧光背景，尽可能与早期指数扩增荧光值区分，要从反应耗材载体、引物探针设计筛选、反应的缓冲体系进行测试。指数扩增期是酶活性的最直接反应，也是POCT设备、反应载体和试剂配合完美与否的证明。此时的设备温度控制、光学信号采集分析、载体生物兼容性、试剂的体系性能需要全方面调整和测试。最后整个扩增完成，必须由严谨的数据算法呈现结果，得出合理的Ct值。

Ct值优化的一小步，是研发人员呕心沥血的无数步。在日夜的焦躁和兴奋中，每一次的“山穷水尽疑无路，柳暗花明又一村”都给了我们又一次前进的勇气和激情。