IVD技术篇（上）：胶体金常见问题分享——中空和堵膜

2022-9-3 11:14| 编辑: 小桔灯网| 查看: 5896| 评论: 0|来源: IVDdiagnosis

摘要: 为什么液体会绕着包被原料走呢？那肯定是液体流经这个地方的时候被堵住了。是什么原因导至的“堵”呢？我们来思考一个小常识：比如你吃饭的时候不小心把一个残渣落在了茶几上，几天没擦，干在上面了。你用湿抹布去擦 ...

为什么液体会绕着包被原料走呢？那肯定是液体流经这个地方的时候被堵住了。是什么原因导至的“堵”呢？我们来思考一个小常识：比如你吃饭的时候不小心把一个残渣落在了茶几上，几天没擦，干在上面了。你用湿抹布去擦，发现残渣硬邦邦的根本擦不掉，而且主要是，它不吸水！只有吸水了它才容易被擦掉，所以怎么让它快速吸水呢？假如你的食物残渣是含有蜂蜜或者是淀粉之类的，泡一会就相对容易擦掉；假如食物残渣是肉制品或者含油脂较多的，你还得往抹布上放点洗洁精。

好了，我们再回来分析一下我们的试纸条中空问题。蛋白包被在NC膜上，如果它本身的吸湿性很差，那么血清自然会绕着它走。怎么能够让它吸湿性增强呢？可以考虑加糖！糖有很强的吸湿性，如果我们在包被缓冲液里加点糖，那蛋白吸水的能力会大大增强，与血清接触的时候不至于会绕着走，可以快速地渗透；还可以考虑加醇！醇的加入也可以部分提升蛋白的亲水性的，这是很多前辈给我们留下来的宝贵经验。那加洗洁精可以吗？可以加，但不是加在NC膜上，NC膜对于表面活性剂是十分敏感的，如果你感兴趣的话，往包被缓冲液里面加点吐温或者甘油试一下，可能线条宽度会让你怀疑人生。

我们可以将表活加在样品垫处理液，或者是样品稀释液，它们可以降低血清的表面张力，使其与蛋白的浸润性变强。但是表活的加入很多时候会引入假阳，而且这个假阳很有特色，就是中空一样的假阳，只有T线的上下边缘会出现红色印迹。这种情况我也不太好解释具体的原因，只是我了解的是，一般假阳都是基于静电吸附或者是疏水作用这种非共价键产生的，如果我们能加入某种成分改善抗体的带电情况或极性，这种情况应该就可以解决。比如加入微量的SDS或者酪蛋白，引入大量的负电荷；或者是加入BSA、OVA这种杂蛋白，起一个流动封闭的作用，可能假阳的情况会有所改善。

还有一个因素，与包被抗体引入的疏水和假阳可能都有关系，那就是盐离子浓度，尤其是以氯化钠为代表的盐离子浓度。盐离子浓度过高，烘干的时候nc膜表面会形成结晶，也会导至其瞬时浸润性变差；而且貌似盐离子浓度高的话，表活的加入引发假阳的概率会更高，当然这不是绝对的，也有相反的时候。不太好解释原因，大家可以根据自己的经验来调试和观察。

总而言之，改善中空的中心思想就是改善浸润性，中间若产生其他问题可以再逐一分析和解决，总会达到你的预期。

二、胶体金常见问题分享——堵膜

有些人在做胶体金上样检测的时候，可能会遇到如下的问题：我上阴性样本胶体金释放的很好，背景也非常干净；上阳性样本的时候，发现胶体金全部堵在了结合垫和NC膜的贴合处，而且这种堵膜并不是死金产生的，因为堵住的胶体金依然是鲜红的颜色。这是为什么呢？我列一张图：

为什么阴性样本没事，阳性样本就堵膜了呢？首先，我们分析一下，堵的直接原因，那肯定是颗粒变大了，NC膜的那点孔径，它根本钻不过去了。为什么阳性样本会导至胶体金颗粒变大了呢？它的微观世界是怎么样的呢？该怎么解决呢？

最近做新冠检测的同学可能遇到过这种问题，尤其你的双抗夹心抗体对针对的是膜蛋白的，其实很多做微生物检测的同学都遇到过这种问题。答案就是：你的检测对象对于你的抗体而言是多价的。当我们的检测物含有重复序列的时候，它所表达的蛋白就会有很多个相同的位点，如果你用的抗体针对的位点正好是这个，那直接导至的结果就是交联。我画个图帮助大家理解一下：

如图中所示，如果你的抗原被标记抗体结合以后，还留有相同的位点供其他的标记抗体结合，那结果就像织毛衣一样，很快就成网状结构了，堵膜那不是分分钟的事嘛。

好了，道理说清了之后，我们该说说怎么解决这个问题。有一些同学想通过裂解蛋白的方式进行解决。因为病毒或者细菌的检测本身就伴随着蛋白的裂解，他们所以他们想找到一种温和的裂解液，使得蛋白裂解成更小的片段，让相同的位点分裂开来，蛋白的价数降低，又不影响抗原抗体的结合。这样实施的结果如何呢？我也不太好说，因为我也没试过，怎么说呢，反正也算是解决问题的一种思路，但是我总感觉这种裂解液应该挺难找的，或者说能达到预期目的概率应该不大。

在这里呢，我给大家谈一下我的思路，因为我没具体实施过，所以只能算是给大家一个参考。我们可以想一下，蛋白交联的形成因素。如果两个物质含量相当，那交联肯定是很容易的，那如果其中某一种物质相对于另一种物质含量较低呢？那交联是不是就不是那么容易了。所以，如果我们把胶体金标记物的喷金量大幅度提高，检测物又相对稀释，是不是就会好一些呢？大家可以揣摩一下。

另外还有一种思路。胶体金交联是由于每个胶体金分子上都标记了很多个抗体，如果每个金颗粒质只标记上一个抗体分子呢？我给大家再画个图，帮助大家理解一下：

那么胶体金是不是仅仅是颗粒变大了一丢丢，而不至于成网呢？

好了，点到为止，大家下期见。

信息来源：IVDdiagnosis，作者：IVDdiagnosis

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