病人标本检测结果一致性 冯仁丰 （三）ERM-DA470k/IFCC和ERM-DA472/IFCC取代了CRM470 1989年国际临床化学和检验医学协会（IFCC）开始对人血清蛋白的含有基质的参考物质的处理、确认和定值。1993年，共同体的参考局发布了CRM 470（以后被重新评价和命名为ERM-DA470），被确认为14种蛋白的参考物质。对ERM-DA470内CRP定值的蛋白浓度，采用了1st International Standard CRP 85/506校准的测量。由于CRM 470已经为多个特定蛋白的标准化服务了许多年。确实使这些项目的检测结果在全世界范围内的可比性有了实在的进步。 但是，2008年颁布的多种蛋白参考物质怎么将原来的CRM-470成为ERM-DA472/IFCC和ERM-472k/IFCC？究竟为什么？
CRP的这张图以往从来没有公开！只给大家看前几张，说明ERM-DA470的价值！但是，很早就发现CRP很不好！CRP有问题了！
1.互换性有问题了 2001年，Thomas B. Ledue和A. Myron Johnson在发表的文章《Clin Chem Lab Med 2001;39(11):1129-1133 Commutability of Serum Protein Values: Persisting Bias among Manufactures Using Values Assigned from the Certified Reference Material 470 (CRM 470) in the United States 》中指出：美国生产厂商使用CRM 470设定值在厂商间依然存在偏移！ “摘要： 在引入国际参考物质（CRM 470；人血清蛋白参考制品〔Reference Preparation for Proteins in Human Serum〕）的7年后，血清蛋白的值在厂商间依然有显著差异。有些蛋白如前白蛋白和C4，它们的偏移事实上还在增加。为了改善实验室间结果的互换性、以及若要形成一致的参考区间，需要对标准化作进一步的努力。” 2008年报告以ERM-DA472k/IFCC（可从IRMM获取）取代了ERM-DA470的12种其他蛋白，它不适用于CRP，因为冻干过程使CRP的值出现偏移。ERM-DA470（原CRM 470）参考物质冷冻干燥和以后的复溶，对CRP回收不佳，该蛋白使用了两个市售方法做了检测。最后，为了提供一个对CRP最佳的条件，将物质分开进行液体冰冻保存（ERM-DA472/IFCC）。
研究人员通过SDS PAGE和蛋白印迹法后的凝胶层析，蛋白印迹法后的半（semi-native）凝胶电泳等方法证实了CRP在不同材料具有不同的物理化学状态。发现CRP： •经冷冻干燥后的回收率仅75%； •在冷冻干燥的材料中瓶间的非均相性高； •在冷冻干燥的材料中存在不同的低聚物。
然而，临床所用的分析仪几乎所有的检测都是针对靶蛋白和对应抗体间形成的凝聚物。因此，仪器校准的过程会因低聚物状态而变化，最终导至溯源性链的中止。
2009年2月发布了新的CRP参考物质——ERM-DA472/IFCC。
ERM-DA472/IFCC被证明是可互换的。
同年，官方将由医生和科学家的专家组巨大努力形成的CRM470，重新命名为ERM-DA470。
2.用于CRM470定值的USNRP 7.3.2 国际上认可的参考制品 USNRP被选择，因为它对所有的蛋白定值以质量浓度g/L表示。它也具有任意浓度IU，但是这是第二标准，所以没有用于转换值。人CRP的第一个国际标准，代码为85/506，被用于为CRP定值（任意浓度单位IU/ml和质量浓度g/L二者）。一个安瓿的人CRP Code 85/506内含有0.049 IU，或含有49 mg CRP。以上两个为CRM 470内CRP定值的标准物质均为冻干品！ 摘自：CER 470报告第37页 3.我的问题 已经发现原CRM 470内的CRP，因冻干导至CRP形成各种不一多聚体，影响了它参与免疫反应的能力。因此，在制备新的CRP参考物质ERM-DA472时，将其分装于安瓿，深低温保存。但是，在为其确定参考值时，为了维持溯源性，依然使用CRM 470（现被称为ERM-DA470）为参考物质对其定值。 问题：CRM 470内的CRP已经有问题了，怎么还以它为准为ERM-DA472定值？这个定值是对的？ 我查阅了原CRM 470的说明书，发现当时为该物质定值使用的参考物，也是冻干物！从今天的认识来说，20余年前的科学家还没有知道冻干对CRP值的影响，不懂者无罪！但是今天已经知道冻干对CRP的影响后，还依然使用明明知道是不对的参考物质为已经纠正的新参考物质定值。溯源性是有了，但是正确度何在？究竟追求溯源性的目的是什么？
CRM470 计量上的溯源性 4.新的CRP定值参考方法已经具备 美国标准和检测研究院（NIST）已经提出了对CRP进行可靠定值的参考方法和参考物质。
参考测量系统的形成： 方案一：以质谱（MS-）为基础的蛋白质组学方式为蛋白量化
较高级方法（第二方案）完整蛋白的ID-MS 测量方式： 1、以核素标记的rCRP加于样品中； 2、以单克隆抗体纯化添加过CRP的样品； 3、以胰蛋白酶消化添加过CRP的样品，分离CRP； 4、以MRM-为基础的核素稀释LC-MS，对多个CRP胰蛋白酶消化的多肽量化，使用标记的和未标记的CRP制备的校准品（即：双核素稀释质谱分析）。
CRP的参考测量系统 令人深思的是：既然CRP已经有了可靠的参考检测方法（测量程序），可是为什么在重新制备了具有血清为基础的特定蛋白参考物质中，为CRP的定值却依然以原来的CRM 470（ERM-DA470）为参考物质，对现在的ERM-DA472/IFCC内的CRP定值呢？ TO BE CONTINUED |
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