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技术解析 | 带你了解液体活检、PCR、NGS、免疫组化、质谱分析五大技术

2022-5-26 15:54| 编辑: 归去来兮| 查看: 2623| 评论: 0|来源: 基因慧

摘要: 在介绍具体的肿瘤基因及分子检测技术之前，先在此简述液体活检的基本情况。

相比于传统的组织活检，液体活检具有无创性、敏感性、动态性等特质，其出现标志着人类在攻克肿瘤癌症的道路上又前进了一大步。因此，在介绍具体的肿瘤基因及分子检测技术之前，先在此简述液体活检的基本情况。

液体活检

■ 液体活检是什么？

液体活检是指，在体液样本中提取分子标志物进行检测分析，为患者的疾病诊疗提供决策信息。实际上，从肿瘤取样角度、相对组织活检而言，液体活检是一类技术术语，且正在不断演化及发展，并无确切定义。

■ 发展历程

■ 范畴

液体活检的采样类型包括：血液（外周血）、唾液、尿液、脑脊液、胸腔积液等；

液体活检分析的分子标志物包括：ctDNA、CTC、外泌体（外囊泡的一种）、肿瘤培养的血小板等。根据美国病理协会官网，液体活检目前的重点是 ctDNA，其他包括 RNA、CTC、细胞外囊泡（EV）和肿瘤培养的血小板（TEP）。

■ 应用

液体活检主要基于肿瘤释放的细胞及核酸（DNA 和 RNA）来评估治疗反应（预后监测、残留疾病检测）、预测肿瘤复发风险、追踪与耐药性相关的突变、可靶向的驱动突变研究和临床试验注册等，可以应用于应用于肿瘤分子分型、肿瘤演变及预后监测等场景。

■ 优势

在临床应用中，组织活检通常是肿瘤诊断和治疗的金标准，但存在两方面弊端：一是侵入性意味着样本有时无法取得，需要考虑肿瘤的位置和患者的状态；二是组织样本的含量低等无法满足 NGS 等检测的要求。

相对组织活检，液体活检的整体优势主要在于获得侵入性要小得多，允许频繁、连续的采样，从而持续追踪肿瘤发展及预后反应；另外可以在无法进行组织活检下进行液体活检。

■ 前景

据美国病理协会，短期内液体活检可能更有助于确认临床或放射学上已明显病变患者的恶性肿瘤；此外，其是组织活检不可执行情况下的可选方案。

基于已获批产品，液体活检也大大加速了新药研发的靶点发现、临床试验入组以及伴随诊断的发展，在预后检测、复发评估等方面有着巨大的前景，核心挑战是提高灵敏度。该领域的下一个挑战和机会是将液体活检纳入常规癌症筛查计划，以促进癌症早期诊断。

液体活检包括多种技术，以下将介绍其中最具代表性的几种。

荧光定量PCR（qPCR）及数字PCR（dPCR）

■ 定义及意义

PCR（Polymerase Chain Reactio，聚合酶链式反应）是在体外模拟 DNA 复制的过程，快速扩增特定基因或 DNA 序列，又称为基因的体外扩增法。PCR 是生物芯片、测序等分子检测技术中的基础技术，也是一项独立的检测技术，对医学诊断等领域是革新式推动。

■ 原理及步骤

完成 PCR 过程的基本要素包括：

● DNA 模板：包含目标序列的样本 DNA

● DNA 聚合酶：合成与目标序列互补的新 DNA 链的酶，如TaqDNA 聚合酶

● 核苷酸：dNTP（A/T/C/G）或脱氧核苷酸三磷酸，是构建新 DNA 链的元素

● 逆转录酶：在逆转录 PCR中需用逆转录酶将样品 RNA 转化为 cDNA

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