价微量著，抗原检测千亿市场如火如荼

2022-4-29 10:24| 编辑: 归去来兮| 查看: 2097| 评论: 0|来源: IVD分享库

摘要: 新冠病毒外形像一个圆球分为两个部分，里面是RNA核酸，外层是蛋白质。

一、新冠病毒及其检测方法概述

新冠病毒外形像一个圆球分为两个部分，里面是RNA核酸，外层是蛋白质。结构蛋白有4种，分别是刺突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白。人体一旦感染病毒，这些结构蛋白可作为免疫原刺激浆细胞产生特异性抗体。PCR核酸检测是检测病毒里面的核酸，抗原检测的原理是检测是否存在病毒蛋白，其检测的是核衣壳蛋白，即N蛋白。因为N蛋白表达量比较高，更容易突变，感染新冠以后，病毒在咽部大量复制，检测N蛋白就可以间接反映是否有新冠病毒感染。

新型冠状病毒的检测方法主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测。核酸检测目前是新型冠状病毒检测的“金标准”，具有早期诊断、灵敏度和特异性高等特点，具体表现为：（1）检测限低，病毒浓度在不足100拷贝数/mL时即可测出；（2）特异性在98%以上；（3）由专业人士操作，可重复性好。但抗原检测操作便捷、检测迅速，可作为核酸诊断的补充手段。

核酸检测依赖的技术是实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）。它是利用发展了几十年、非常成熟的PCR 技术，将原本微量的、无法直接检测到的特定的病毒核酸序列逆转录成DNA后再指数级扩增2的40次方倍（超过1万亿倍）。每扩增一条DNA，会伴随着产生一个荧光分子，机器通过检测荧光信号的强度，可定量判断病毒核酸的起始量。核酸检测的结果用循环数阈值（Cycle threshold），也就是Ct值来表示，它代表达到荧光信号强度到达设定阈值时所经历的扩增循环数。Ct值越低，说明不用太多轮扩增就可检测到病毒，也就意味着样品中的病毒含量越高。反之，Ct值越高，说明样品中的病毒含量越低。

抗原检测则是利用免疫学方法，定性检测样品中是否含有病毒的核衣壳蛋白（N蛋白）或刺突蛋白（S蛋白），只需15分钟即可出结果。与核酸检测相比，抗原检测没有对样品进行扩增，所以它的检测限比核酸检测要高，Ct值在25以下时，大部分抗原检测产品可以比较可靠地（以95%的阳性检出率）检测出阳性。

抗体检测针对的是人体对病毒或疫苗产生的抗体。由于抗体在感染后1~2周才会产生，这一方法无法应用于早期筛查。

新冠病毒检测方法分类

新冠病毒检测方法优缺点

二、抗原检测相关

1、抗原检测原理概述

抗原检测适用人群包括三类，即到基层医疗卫生机构就诊，伴有呼吸道、发热等症状且出现症状5天以内的人员；隔离观察人员，包括居家隔离观察、密接和次密接、入境隔离观察、封控区和管控区内的人员；有抗原自我检测需求的社区居民。

抗原快速检测可用于2周内出现症状的诊断为急性感染的病人。其操作简单、出结果快、成本低。尽管检测下限为每毫升105-106基因组拷贝，但病毒载量低于每毫升106基因组拷贝的个体不可能传播病毒，因此可快速识别最有可能传播病毒的感染者。几乎所有的抗原测试都使用新冠病毒核衣壳蛋白作为靶标，因此受变异株影响的可能性较小。检测方式为胶体金免疫层析、乳胶法、荧光免疫层析三种类型。

胶体金免疫层析原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成一定大小的金颗粒，在静电的作用下成为稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合。应用胶体金免疫层析技术以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液到达指定位置反应、显色来检测样品中毒素的含量。检测时，样品中的毒素与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体与检测线（T线）上的毒素偶联物之间的结合，导至T线颜色变化，通过T线颜色的深浅来判断毒素的含量。无论样品中毒素的含量高低，质控线（C线）均显色，以示检测有效。

胶体金免疫层析法检测原理图示

乳胶法原理：乳胶法和胶体金法的标记物不同，乳胶法是以乳胶颗粒作为载体的间接凝集试验。吸附可溶性抗原在其表面，特异性抗体与之结合后，可产生凝集反应。检测流程与胶体金免疫层析法类似。此方法特点在于不需使用特殊仪器，肉眼即可判断，并且操作简便、检测时间短。

荧光免疫层析法原理：检测靶标为病毒蛋白（如核衣壳或刺突蛋白），通常采集鼻咽拭子。检测方法：需要手持式荧光免疫分析仪。检测人员使用咽拭子取样，之后将咽拭子插入提取管，旋转10次，挤压并抽出拭子，使液体尽可能留在管内，盖上滴头。依次向各检测卡加样孔滴加3滴提取物，静置15分钟，将检测卡插入仪器检测口，填写样本信息或扫描信息，点击快速测试按钮，设备自动判读结果。直接针对病毒中特有蛋白质（即抗原）检测，能快速在急性感染期检测出人体是否含有病毒，可在早期对疑似人群进行分流和管理。

目前的新冠抗原检测试剂盒采用了主流的两种技术路线，分别是荧光免疫层析法与胶体金免疫层析法。免疫层析技术又名侧向流免疫层析，是一种薄层色谱分析技术。该技术是将已知的抗原或抗体预先偶联到载体上作为捕获线，待检测样本在载体的毛细作用带动下流经捕获线，若样本中存在相应的抗体或者抗原，就能和载体上的抗原或抗体发生特异性反应而吸附到载体上，并通过标记物显色或者发光以确定是否含待测物或者待测物的含量。

荧光免疫层析法与胶体金免疫层析法的主要区别

抗原自测流程

2、抗原检测准确性

自测盒的检测结果准确与否主要看“灵敏度”和“特异性”这两个指标。灵敏度：检测出被感染者为阳性的能力，特异性：检验出非感染者为阴性的能力。世界卫生组织（WHO）建议检测灵敏度不低于80%，特异度不低于97%。

国内不同品牌自测盒检测情况

三、国内抗原检测拉开序幕

1、抗原检测政策相关

2022年3月11日，《新冠病毒抗原检测应用方案（试行）》方案发布，国务院应对新冠病毒肺炎疫情联防联控机制综合组决定，在核酸检测基础上，增加抗原检测作为补充。

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