新品上市丨无缝克隆系列产品全新升级

相信很多做过分子克隆的人都遇到过这种情况：经过N次的PCR、酶切、连接、转化之后，阳性率依旧很低。因此，近些年，一种更简便、快速、高效的克隆方法--无缝克隆技术应运而生，该方法有效避免了传统酶切-连接克隆受限于酶切位点的弊端。经过多年潜心研究和技术改进，康润生物带来了全新升级的无缝克隆产品。相较于之前的一步法无缝克隆试剂盒，升级后的T196、T197更加的快速高效，并且针对您的不同需求进行了特异性优化。还在等什么，一起来感受新品的魅力吧！

无缝克隆的原理可以概括为三步反应：

1. T5核酸外切酶从DNA片段的5’端切割一条链，产生的单链DNA末端（overhang）两两配对，形成一个有间隙（gap）的环状DNA；

2. DNA聚合酶通过DNA合成填补间隙，产生一个只有缺刻（nick）的环状DNA；

3. Taq DNA连接酶通过形成磷酸二酯键修复缺刻，得到一个完整的双链DNA，也就是构建完成的载体。

无缝克隆实验的主要操作可以分为三个步骤：

1、获取线性化载体

①酶切法：在目的载体上选取合适的酶切位点进行单酶切或双酶切，对酶切后的质粒进行胶回收纯化；

②反向PCR法：在插入位点的两侧设计一对方向相反的引物对目的载体进行扩增，通过胶回收获取线性化的质粒片段。

2、通过PCR获取插入片段

在引物5’端引入同源序列，使扩增产物与线性化载体之间具有完全一致的序列（16-25 bp）。

3、无缝克隆反应

根据无缝克隆试剂盒的说明书，将线性化载体、插入片段以及无缝克隆反应酶液按比例混合，恒温反应5-30 min。

通过以上三步，就可以完成质粒重组。只要再进行后续的转化感受态、菌落PCR等操作，就可以获得阳性克隆。

1、省时

可无需进行酶切、酶切产物回收等操作，连接反应最快5 min内可完成，大大缩短实验周期。

2、省力

可一次反应实现多个插入片段的顺序拼接克隆，且无需考虑酶切位点的限制。

3、高效

连接效率高，克隆阳性率高达90%。

4、无副作用

连接片段之间不会引入任何不必要序列。

1、更快速

EZ-HiFi无缝克隆试剂盒（T196）单片段连接5 min内完成，多片段连接15 min内完成。

2、更高效

克隆阳性率可达95%以上。

3、通用性

单片段和多片段克隆均可适用；不同克隆系统之间转换方便。

4、更保真

EZ-HiFi无缝克隆试剂盒（T196）可用于定点突变。

5、更灵活

不受载体末端（平/粘性）的限制和限制性内切酶位点的影响；EZ-Flex无缝克隆试剂盒（T197）适用于构建随机序列载体文库。

秉承GenStar原无缝克隆产品的性能优势，克隆效率更上一层楼。

多片段克隆：1.2 kb、1 kb、0.8 kb的片段同时连接至5 kb线性化载体

关于北京康润诚业

北京康润诚业生物科技有限公司（GenStar）是一家从事生物技术产品研发、生产和销售的国家高新技术企业，总部位于北京市中关村生命科学园内，可提供高品质的PCR、qPCR、核酸纯化、DNA Marker、蛋白Marker、快速克隆表达载体、细胞产品、蛋白产品和生化试剂等多个系列千余种产品。

GenStar-康润生物在广州、上海、天津和南京等主要城市设立了销售办事处，与清华大学、北京大学、中国农业大学、中科院动物所、中科院遗传所、中山大学、华南农业大学、中科院上海巴斯德所、中科院上海生化细胞所、西北农林科技大学、西安交通大学、天津大学、南开大学、南京大学、东南大学等百余所院校建立了良好的合作关系。同时在全国拥有40多家签约经销商，通过各地的经销商伙伴为广大科研和工业客户提供优质的产品、原料和技术服务。