PCR反应中检测靶标为RNA时，首先使用逆转录酶将RNA逆转录为cDNA，再通过DNA聚合酶的作用进行PCR扩增。常见的逆转录酶是莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)，它不耐高温，只能在相对较低的温度(~50°C)下维持其酶活性。但是在cDNA合成的步骤当中，较高的逆转录温度对于降低RNA二级结构对逆转录的抑制作用和减少非特异引物结合是有益处的。 迈迪安公司开发了一款新的热稳定MMLV-RT，具有更高的耐热稳定性，并且降低了RNase H的活性。该酶可以在60°C的温度下合成第一链cDNA。对于具有复杂二级结构的RNA靶标，更高的变性温度可提高cDNA的产量。
热稳定性高至 60 度
实验组：迈迪安的55C MMLV-RT（红色）、标准MMLV-RT(灰色)和供应商T的热稳定MMLV-RT（黑色)分别在40°C-70°C热浴10分钟后，用于多重一步法RT-qPCR检测。 对比组：存储在-20°C的以上三款酶直接拿出用于同样的多重一步法RT-qPCR检测。所得的Ct值作为基础值与实验组的酶获得的Ct值对比得到Δct值。 数据表明，与其他MMLV-RT酶相比，迈迪安的55C MMLV-RT的热稳定性有所提高，并能在60°C以下的温度下高效合成cDNA。 更高效率和灵敏度 55C MMLV-RT是专为提高逆转录效率，更高灵敏度，提高一步法RT-qPCR检测极限(LOD)而设计的。
在多重一步法RT-qPCR检测中，使用10倍连续稀释的哺乳动物总RNA，分别使用55C MMLV-RT(红色)和供应商T(黑色)进行对比检测灵敏度。结果表明，55C MMLV-RT具有更高灵敏度和荧光强度，性能更好。 与冻干或风干兼容 55C MMLV-RT的专利配方可兼容冻干或风干的检测，可用于开发常温稳定的干燥型检测。
55C MMLV-RT用于可风干RT-qPCR预混液 Mix中，并在烘箱中风干(红色)，复溶后与新鲜配置的湿液(蓝色)进行性能对比，用于多重RT-qPCR检测中检测呼吸道RNA病毒(甲型流感、MERS-CoV和RSV)。结果表明，55C MMLV-RT在风干前后的性能完全一致，没有受到风干过程的影响。 多重扩增性能 55C MMLV-RT 适用于多重RT-qPCR反应。
分别用55C MMLV-RT(红色)与供应商X(黑色) 对10倍连续稀释的哺乳动物总RNA进行四重一步RT-qPCR检测 。结果表明，55C MMLV-RT比对比试剂具有更大的多重扩增能力。
迈迪安生物科技是一家全球领先的生物诊断试剂上游原料企业。专业研发生产各种优质的抗原抗体、免疫阻断剂、PCR聚合酶和优化的预混液、核苷酸等免疫和分子诊断试剂关键原料，为人体、动物、农业、环境及食品安全等各种检测提供全面的解决方案。44年来，迈迪安已经成为全球各领域诊断企业的首选原料供应商！迈迪安始终坚持以提供创新的生命科学解决方案和建立值得信赖的合作伙伴关系为我们的宗旨。为体外诊断试剂公司提供优质的原料和服务，使其有助于推动这些领域的发展。
|
/3 
浙公网安备33010802005999号 
