在化学发光免疫分析中，需要对抗原或抗体等分子进行标记进而得到相应的化学发光标记物，基于不同的发光平台，所使用的标记分子不同。直接发光平台通常标记吖啶酯、ABEI 等小分子化合物；酶促发光平台通常标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）等，而电化学发光平台则需要标记三联吡啶钌等分子。 在标记完成之后，标记产物的分离纯化对化学发光试剂的质量及稳定性非常重要。分离纯化可将游离的标记物或游离的抗原/抗体，以及可能存在的不同的标记物形式进行去除，从而只保留比较均一的抗原/抗体-标记物。从而达到尽可能降低分析过程中的检测本底并避免出现假阳性问题，同时保证试剂的批间差最小化，保证试剂的稳定性。 凝胶过滤层析根据生物分子大小及形状对其进行分离，样品加入凝胶过滤层析柱之后，在层析柱上进行分离，大分子先洗脱，小分子后洗脱。 ● 高自动化：配合设备使用，可自动完成多个样品的纯化过程，节省时间和人力成本。 ● 优重复性：层析方法可重复性好，纯化方法一旦确定，可保证不同批次纯化效果一致，从而保证试剂的批间差最小化。 ● 全数据记录：整个实验过程的数据可被完整的记录。保证原料生产过程的可追溯性。
图 1. 凝胶过滤层析 (SEC) 示意图。 不同大小的分子进入凝胶过滤层析柱中之后，由于走的路径不同，流出的速度不同：分子量越大，走的路径越短，越早流出。 ● 用于直接发光平台或电化学发光平台 ● 以吖啶酯、ABEI、三联吡啶钌等分子为标记物 ● 标记物分子量较小 ● 标记物与被标记的抗原/抗体分子量相差较大 ● 可使用 Desalting 脱盐柱进行纯化
图 2. 使用 HiTrap Desalting 柱进行脱盐实验。 其中蓝色为蛋白紫外吸收峰（标记物纯化中此处指征标记了小分子的抗原/抗体），红色为 NaCl 电导峰（标记物纯化中此处指征游离的小分子标记物）。 如何选择合适的脱盐柱： ● 用于酶促发光平台 ● 以辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶等为标记物 ● 标记物分子量较大 ● 标记物通常与被标记物分子量相差较小 ● 使用高分辨凝胶过滤（如 Superdex 系列凝胶过滤层析柱）进行纯化 图 4. 使用 Superdex 200 Increase 10/300 GL 蛋白分离结果图。 其中 1. 甲状腺球蛋白（669KD），3 mg/mL; 2. 铁蛋白（440KDa），0.3 mg/mL；3. 醛缩酶（158KD）3 mg/mL；4. 伴清蛋白（75KD）, 3 mg/mL；5. 卵清蛋白（44KDa）, 3 mg/mL; 6. 碳酸酐酶（29KD）; 3 mg/mL; 7. 核酸酶 A（13KD），3 mg/mL 如何选择合适的高分辨凝胶过滤层析柱： |
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