NGS探索 | 关于文库构建，您所需要知道的“小事儿”

2021-4-6 16:32| 编辑: 归去来兮| 查看: 2122| 评论: 0|来源: 基因谷

摘要: 二代测序技术已经走进“千家万户”，它可以帮助老师们对于自己的样本进行基因组层面的分析。如何有效的构建自己的文库，也成为每个实验室需要考虑的问题，小编在这儿为您总结了一些有关文库构建的知识，来帮助您更好 ...

二代测序技术已经走进“千家万户”，它可以帮助老师们对于自己的样本进行基因组层面的分析。如何有效的构建自己的文库，也成为每个实验室需要考虑的问题，小编在这儿为您总结了一些有关文库构建的知识，来帮助您更好的理解DNA建库的实验。

1.关于Input DNA

DNA质量

Input DNA的质量、片段大小以及浓度对于文库是否可以成功构建是至关重要的，这就需要对于不同类型的样本&不同的应用开发不同的protocol来构建有效的文库。同时，对于明确的样本类型以及应用，也要尽可能保证input DNA浓度上、片段大小以及质量的一致性。

根据不同样本类型以及不同的应用，可以选择多种方式对于input DNA做均一化。可以选择的分析方式从便宜且简单的方式到昂贵复杂的流程，通常包括：使用spectrophotometric 或者fluorometric (如PicoGreen®)来分析浓度；确定片段大小或者片段选择的方法；通过qPCR的方式来确定DNA的质量或者浓度（如KAPA Human Genomic DNA Quantification and QC Kit）。

DNA溶解Buffer组成

末端修复的酶反应需要游离的Mg²⁺，所以input DNA应该溶解于水中或者低盐的缓冲液中，几乎不包含或者不包含如EDTA的金属离子螯合剂。

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