检测人员必看的采样知识点

实验室检测始于样品采集，也最容易忽视样品采集。样品采集最重要是选择正确的样品类型，使用合适的采样工具和进行合理的运输和处理。

一、样品类型

    常见的样品类型如下：

采样的方式可以参照农贸（集贸）市场新型冠状病毒环境监测技术规范》：

    1.从业人员咽拭子、手部、衣物和其他物体表面拭子样本：要求用病毒采样管中的病毒保存液，充分浸润采样棉签后，对拟采集的手部或物体（包括公共通道的地面）的表面重复涂抹、涮洗3次以上。同时要满足对采样对象表面，进行多点分布式采样。

　　2.食品表面拭子样本：食品样本不可直接进行采集，应当首先将拟采集的食品小心分离，并存放于洁净采样袋后，再进行拭子样本的采集。要求用病毒采样管中的病毒保存液，充分浸润采样棉签后，对拟采集食物样本的表面重复涂抹、涮洗3次以上。同时要满足对样本表面，进行多点分布式采样。

　　3.污水样本：按照市场内排水系统分布情况，选取2-3处污水采样位置，重点为内部管网汇集处、水流方向的下游或与市政管网的连接处。采集拭子样本要求，用采样棉签浸入污水中，使其吸附污水并在采样管中对涮洗3次以上。采集污水样本要求，用聚乙烯塑料瓶收集30-500mL污水水样；大于500mL体积的污水采集可以使用聚乙烯塑料桶或现场水样专用富集设备。同时要满足对污水采样位置，进行多点分布式采样。

　　4.动物样本：对于活体动物，可分别用采样棉签采集其体表拭子、口咽拭子和肛拭子，也可以采集其排泄物或分泌物样本，并在记录单上进行相应记录。对于以经过剥皮等处理的动物样本，分别用棉签采集其体表和体腔拭子样本，要求用病毒采样管中的病毒保存液，充分浸润采样棉签后，对拟采集食物样本的表面重复涂抹、涮洗3次以上。同时要满足对样本表面，进行多点分布式采样。

　　5.其他器具：笼具或鱼缸等装运、养殖动物的容器，需首先观察或了解该容器具体存放、养殖过的动物类型，采集容器内壁拭子样本或内容物液体样本。

　　6.人员聚集、通风不良的局部交易区域、办公室、休息间等环境采集气溶胶样本。

二、采样工具

1.采血管

如果后续需要做核酸检测，抗凝血样品，建议使用含有EDTA抗凝剂的真空釆血管采集血液；血清样品，建议使用无抗凝剂的真空釆血管。

2.采样拭子

建议使用聚丙烯材质拭子，不使用含海藻酸钙拭子或有木杆的拭子，因为它们可能含有灭活某些病毒和抑制PCR测试的物质。也不能使用头部为棉花制品的拭子，因为棉花的纤维对蛋白质的吸附较强，不易洗脱到后续的保存液中。

在《新冠病毒核酸10合1混采检测技术规范》中明确规定，“采样拭子宜选用聚酯、尼龙等非棉质、非藻酸钙材质的拭子，且柄部为非木质材料。折断点位于距拭子头顶端3cm左右，易于折断。”

美国CDC发布《Interim Guidelines for Collecting,Handling, and Testing Clinical Specimens from Persons for Coronavirus Disease2019 (COVID-19) 》中也提到“Use only synthetic fiber swabs with plastic or wire shafts. Do not use calcium alginate swabs orswabs with wooden shafts, as they may contain substances that inactivate some viruses and inhibit PCR testing. ”

目前广泛使用的是一次性无菌的尼龙材质的植绒拭子配合塑料杆，植绒拭子具有更好的吸水性和释放率，根据不同的采样部位，拭子头也有不同的大小和纤维的粗细。

3.样品运输保存液

病毒灭活保存液：适量的胍盐浓度配合多种病毒裂解组分，直接裂解病毒释放核酸，使RNase和DNase失活，保证核酸的完整性，可用于后续qPCR检测。不能用于病毒的培养分离。

病毒运输保存液：含有病毒生存所需的盐类、氨基酸、维生素、葡萄糖以及蛋白质，可以保持病毒活性，后续可以用于病毒的核酸提取检测，还能用于病毒的培养和分离。

4.样品保存管和样品袋

样品保存管应使用无菌、对核酸无吸附作用的螺旋盖塑料管。每个样品管应再套一个样品袋防止样品的泄露和污染。

三、样品中的干扰物

PCR实验中的干扰物，详见：PCR干扰实验的设计思路

1.内源性干扰物 endogenous interferent

体内样品中出现的物质，可干扰对其他物质的检测。

血液：血红素（>1mg/ml），氯高铁血红素(>0.1ng/μl)，甘油三酯，IgG等；

尿液：尿素（20mM）；

粪便：植物多糖、胆酸盐；

组织：蛋白酶、胶原蛋白；

奶：蛋白酶、钙离子；

药物：抗生素、抗病毒药、激素类等。

其他。

2.外源性干扰物 exogenous interferent

来自于体外可干扰其他物质的检测的物质。样本添加剂及在样本采集与处理过程中可与之接触的物质：

试验用品：血清分离胶，样本采集容器及胶塞、导管、导管冲冼液、手套粉末等。

抗凝剂：肝素（>0.1 U/mL）、EDTA（>0.5 mM）等；

有机溶剂：异丙醇（>0.1 IU/ml）、甜菜碱、二甲基亚砜、甲酰胺、甘油、PEG等；

消毒剂：醇类（乙醇>1%）、醛类、酚类（苯酚>0.2%）、过氧化物类、强酸（HCL）、强碱（NaOH）等;

去污剂：SDS（>0.005%）;

土壤：腐殖质

染料：靛青

其他。

    在实际的户外采样条件下，如采集环境样品，样品中可能含有多种干扰物，并且每个场所的干扰物组成都各不相同，这就需要因地制宜的开展PCR干扰实验。

四、样品保存运输条件

新鲜采集的临床标本应在2℃～8℃下，在采集后2—4小时内送至实验室。24h内4℃保存。用于病毒分离和核酸检测的标本应当尽快进行检测，能在24小时内检测的标本可置于4℃保存；24小时内无法检测的标本则应当置于-70℃或以下保存（如无-70℃保存条件，则于-20℃冰箱暂存）。

小结：样品的规范采集运输和保存对于后续检测至关重要，很多实验室检测的假阴性是不当的样品采集运输保存导至病毒核酸降解所致。但是目前仍然有很多实验室忽视采样的重要性。希望本文能够唤醒大家对采样的重视，更加科学合理的采样！