来源：水木济衡

作者：王军

第六篇 标准物质的研制，复杂但是又有“套路”

      标准物质实质上也是一个产品，其开发的过程，如同一个IVD产品开发过程一样，第一步也是要进行需求分析，需求分析包括：潜在使用方都有哪些（IVD厂家的量值溯源需求、医疗器械检测机构对于产品质量评价的需求、医院和临检中心对于实验室质量控制和质量评价的需求）？使用量有多大？需要几个浓度水平及各水平浓度大致如何设置？有没有同类物质及他们的使用状况、价格等等？需求分析非常重要，只有做好正确、详实、系统的需求分析，方向才不会错误。

       需求分析是战略，判断要不要做这个项目。技术可行性研究及研究计划相当于战术，怎么做这个项目。可行性分析把握的原则是技术合理、经济可行、识别所有的潜在问题，要对目标、政策、方案、资源进行充分地调研。可行性研究要形成研究计划，研制一种新的标准物质通常为1年到数年，一个完备恰当的计划是迈向成功的第一步，也是必要的一步！研究计划包括研制内容、研制目标、技术指标、保障措施、计划步骤、完成时间、成果形式等内容。在这里特别要强调要充分调研有无参考测量程序（JCTLM网站）、有无国际、国内标准物质（ JCTLM网站、国内标准物质资源网站）、候选标准物质计划如何制备、成本是多少、制备过程需要哪些设备和耗材，购买周期多长，价格是多少？定值打算找几家实验室？有资质的定值实验室都有哪些？

   接下来开始制备。要求标准物质具有与被测物质相近的组成和特性，因此材料上我们要有所考虑其基质，另外材料也会影响均匀性、稳定性，也要一并考虑。标准物质的数量要满足预期使用，也要考虑效期，因此批生产量也要策划好。以血清标准物质的制备为例，工艺一般是这样的：血清筛选（要剔除溶血、脂血、黄疸等异常血清，要剔除传染病的血清保证生物安全性）→浓度调整（通过添加或透析等方式调整浓度为目标浓度，有的还要添加防腐剂、稳定剂和冻干保护剂）→离心→过滤→分装→冷冻干燥（冰冻血清通常认为没有基质效应，与临床样本最接近，但是-70℃保存不利于贮存运输。而冻干血清2℃～8℃保存，方便贮存和运输，稳定性更好）→包装。

      分装成最小包装后，要进行均匀性检验。对于取样部分，如果是溶液，可在分装的初始，中间和终结阶段取样，如果是冻干粉，可在冻干机的上、中、下层取样。对于取样量，抽取单元数取决于总体样品的单元数和对样品的均匀程度的了解。当总体样品的单元数较多时，抽取单元数也应相应增多。当已知总体样品均匀性良好时，抽取单元数可适当减少。一般来说，当总体单元数少于500时，抽取单元数不少于15个，当总体单元数大于500时，抽取单元数不少于25个。对于均匀性好的样品，当总体单元数少于500时，抽取单元数不少于10个；当总体单元数大于500时，抽取单元数不少于15个。对于测试方法，要选用重复性好、灵敏度高的方法。对于最小取样量，均匀性检验时的取样量，一般作为使用时的最小取样量。物质的均匀性是个相对概念，当取样量很少时，物质的特性量可能呈现出来就不均匀，当取样量足够多时，物质的均匀度就能达到预期要求，因此进行均匀性检验时，应该确定最小取样量，该取样量的多少是由均匀性检验的测试方法决定的，一旦该取样量确定，标准物质定值和使用时都应保证取样量不低于这个取样量。对于均匀性检验统计方法，方差分析法是最常用方法，此法是通过组间方差和组内方差的比较来判断各组测量值之间有无系统性差异，如果二者的比小于统计检验的临界值，则认为样品是均匀的。

      稳定性一般包括贮存稳定性、运输稳定性和使用稳定性。测试方法一般选用定值方法，也可使用常规方法。测试时间间隔，一般原则是先密后疏，一年贮存稳定性考察应不少于5个点。统计方法，一般采用t检验。

      标准物质的定值是对标准物质特性量赋值的全过程，要保证标准物质在不同时间与空间量值的可比性与一致性。要做到这一点就必须保证标准物质的量值具有溯源性，即标准物质的量值能通过连续的校准链以给定的不确定度与国家或国际的基准联系起来。有证标准物质采用以下四种方法定值：①用高准确度的绝对或权威测量方法定值；②用两种以上不同原理的已知准确度的可靠方法定值；③多个实验室合作定值，合作实验室的数目或独立定值组数应符合统计学的要求（当采用同一种方法时，独立定值组数一般不少于８个，当采用多种方法时，一般不少于６个）；4)用与一级标准物质进行比较测量的方法(对于二级标准物质而言)。这一部分大家可以学习ISO导则35《标准物质定值的通用原则和统计原理》。

      标准物质研制完成，应撰写研制报告。如果要申报国家有证标准物质，应向全国标准物质管理委员会提出申请，国家有相应的评审流程、评审要求。大家有需求，可以查阅相应文件规定。

      上面介绍了标准物质研制的一般流程，下面我想说说标准物质生产的体系要求。检测和校准实验室有质量体系要求，遵循的标准是ISO/IEC 17025；医学实验室有质量体系要求，遵循的标准是ISO 15189；医学参考实验室有质量体系要求，遵循的标准是ISO 15195；标准物质生产也有质量体系要求，其遵循的标准是ISO 17034《标准物质生产者能力的通用要求》。标准物质生产者（reference material producer，RMP）建立这样的体系能对RM的生产管理、质量控制有很大的帮助，使RM的质量更加稳定、可靠、一致、可持续，也能极大促进研制效率提升。ISO 17034规定RMP应建立文件化的管理体系，制定质量方针和质量目标，各项政策、体系、计划、程序、作业指导书、研究成果等形成文件。要识别RM生产策划、材料制备、均匀性和稳定性检验、定值及不确定评估、标签证书等生产过程中的重要环节，定期开展质量监督，对不符合工作和/或不合格产品进行控制，采取纠正措施和预防措施，定期开展管理评审和内部审核。RMP质量管理重点关注人员、合作者、环境、仪器设备、记录、不符合工作的控制和纠正等环节。