供 稿：体外诊断学院 来 源：IVD销售实战课堂 化学发光免疫分析方法 (chemiluminescence immunoassay ，CLlA) 创建于1977 年，由 Halmann 等人在ＲIA和EIA理论的基本上，将免疫反应的高特异性与化学发光的高灵敏性结合起来，建立的一种用于检测微量抗原、抗体、激素、酶等的新型免疫学分析方法。今天我们从专业的角度就化学发光的方方面面进行分享。 ◆ ◆ ◆ 免疫检测发展历程 60年代，使用的是放射免疫检测，优点：成本低、灵敏度高，但缺点很明显，存在放射性污染、有效期短、操作复杂。
70年代，出现胶体金技术，虽然操作简单快速，然而，灵敏度低这一问题，始终无法解决，这也是技术本身决定的
80年代，出现了酶联免疫法和时间分辨法，比如以上海科华为代表的。国产企业研发的，酶联免疫技术检测产品，成本低且性质稳定，这也是为什么到目前为止，该方法学一直沿用至今，而其灵敏度和精确度问题，也决定了他从此不能担当大任。而时间分辨法虽然一定程度上解决了灵敏度问题，而更多的缺点也暴露出来了，操作复杂，成本高，反应时间长，然而在化学发光还没有问世之前，比如以上海新波为代表的，时间分辨方法学为主的国产企业慢慢发展了起来。如今上海新波也早就被PE完成了战略收购。
90年代，化学发光开始问世，虽然在国内的推广经历了很长的过程，随着21世纪的到来，在国外技术的影响下，化学发光开始不断发展，尤其是2010年以后，化学发光逐步开始了大面积的，时间分辨方法学替换进程，如今在免疫检测市场，无疑化学发光是独树一帜，引领免疫检测市场，成为免疫诊断主流技术。 ◆ ◆ ◆ 化学发光检测原理 关于化学发光检测原理，化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析仪器。化学发光免疫分析仪包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体，回到稳定的基态时，同时发射出光子,我们可以联想以下萤火虫，一闪一闪的，就是生物化学反应后发出的的光信号，而化学发光的原理也是类似的，无非是原理不同，但道理是一样的
当光子发出后，化学发光免疫分析仪器中核心探测器件也就是光电倍增管，由单光子检测并传输至放大器，并加高压电流放大，放大器将模拟电流转化为数字电流，数字电流将发光信号由R232数据线传输给电脑并加以计算，得出临床结果。 而免疫反应系统是将发光物质直接标记在抗原（化学发光免疫分析） 或抗体（免疫化学发光分析）上或酶作用于发光底物。
而关于免疫反应体系这里必须讲清楚，抗原抗体反应，这个里面是有未知和已知的关系，如果待测物是测抗原，则抗体是已经知道的，如果待测物是测抗体那抗原是已知的。而前面已经讲了化学发光现象，简单的讲就是光信号的强度和待测物浓度是成一定正比关系的，或者是可以通过，相关关系式换算出来的。 ◆ ◆ ◆ 化学发光的技术分类 技术分类是根据发光体系也就是发光剂的不同进行分类，可分为：间接化学发光、电化学发光、直接化学发光、光激化学发光。今天我们主要讲讲前三类目前主流的发光技术。 1、间接化学发光 ·他是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP)或碱性磷酸酶（ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原（或抗体）发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物（也就是发光剂）,酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。 优势：发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，发光信号强而稳定，且发光时间较长；检测方式简单、成本较低。 关于间接化学发光，我们要明白以下三点：1、是用酶进行标记抗原或抗体；2、标记复合物反应过程中加入底物也就是发光剂后，经催化和分解产生发光；3、光信号转化为电信号，并由计算机进行处理和换算得到实验结果。代表厂家：贝克曼、迈瑞、西门子、安图等。 2、直接化学发光 它是用吖碇酯等直接标记抗体（或抗原）,与待测标本中相应的抗原（或抗体）发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖碇酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂过氧化氢和氢氧化钠形成碱性环境，吖碇酯在不需要催化剂的情况下分解、发光。 优势：试剂稳定性好，易于保存；标记物为小分子，对标记的抗原/抗体的空间位点几乎不造成影响；本底低，灵敏度好，结果稳定。代表厂家：雅培、新产业、索灵等。
关于直接化学发光，我们需要明白以下三点：1、用压吖啶酯等标记物标记抗原或抗体；2标记复合物反应过程中加入氧化剂过氧化氢和氢氧化钠形成碱性环境进行分解和发光。；3、光信号转化为电信号，并由计算机进行处理和换算得到实验结果。
3、电化学发光 是以电化学发光剂三联砒锭钌标记抗体(或抗原),以三丙胺(TPA)为电子供体,在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应,它包括电化学和化学发光两个过程。 优势:可控的反应体系快速检测时间高精密度和高灵敏度宽广的检测范围。 关于以罗氏为代表的电化学发光，我们需要明白以下三点：1、用电化学发光剂标记抗原或抗体；2、电化学反应过程中因电子产生转移而出现化学发光；3、光信号转化为电信号，并由计算机进行处理和换算得到实验结果。 以上就是我们化学发光的三种主流化学发光反应方法学介绍 ◆ ◆ ◆ 化学发光检测项目及临床意义
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