HPV检测国内公司技术总结

开展宫颈癌筛查可以有效降低宫颈癌的发病率和死亡率。在北美、澳大利亚及欧洲等已有完善筛查制度的国家或地区，宫颈癌的发病率和死亡率均明显下降。而在发展中国家，子宫颈癌的发病率和死亡率却没有明显改善。我国是世界上最大的发展中国家，开展大规模宫颈癌筛查对提高人类质量具有重要的推动作用。

筛查是指在癌症出现明显症状前通过某些方法去发现它，通过筛查可以发现早期的癌症、甚至癌前病变。宫颈癌的筛查包括宫颈细胞学检测及人类乳头状瘤病毒(HPV)检测。细胞学检测包括巴氏涂片和TCT液基细胞压片。TCT相较于巴氏涂片更易于发现异常细胞，敏感性较高，但价格相对较高。HPV DNA检测相比细胞学检测的灵敏度更高，而且能够对高危型和低危型进行分型和定量检测，是目前宫颈癌早期诊断主要发展方向之一。一旦细胞学或者DNA病毒筛查发现异常，可进一步实施阴道镜和组织活检，并开展进一步治疗。

HPV筛查过程

HPV分子诊断技术详解

1、qPCR

qPCR, (Real-time Quantitative PCR，即实时荧光定量PCR)，是PCR的第三代技术。该技术通过在扩增时向扩增产物做个荧光标记，随着产物的增加，荧光信号增强，通过实时检测荧光信号就能得到扩增的DNA数量。荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料，主要有TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）和SYBR Green I，EvaGreen、LC Green荧光染料等。我手上有一份TermoFisher出的实时荧光定量 PCR 手册，可关注后回复“实时荧光定量 PCR 基础知识”下载领取。

qPCR原理之一

2、PCR-反向点杂交

PCR-反向点杂交，也称反向斑点杂交。PCR-反向点杂交即将生物素标记的特异性PCR扩增产物与固定于膜上的探针杂交显色，进行基因分型、基因突变的检测。这种方法最大的特点是结合PCR进行核酸分子扩增，通过在不同位置固定数十甚至数百种等位基因，只需要1次杂交，就可以实现多种等位基因的筛查。是DNA印迹技术的进化版本。

反向斑点杂交原理

3、基因芯片

基因芯片本质上也是依靠DNA分子的杂交，其与反向斑点杂交有着异曲同工之处。基因芯片在基底的选择上更广，固定探针数量也更多，其加工也更依赖于微加工技术，因此称为基因芯片。个人认为，基因芯片会是DNA印迹技术最主要发展方向。

基因芯片

4、流式荧光杂交法（fluorescence in situ hybridization,FISH）

该技术源于荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）。FISH是利用标记的DNA探针，在细胞内部与DNA进行原位杂交，并用荧光的方式作为信号读出。流式荧光杂交法是将荧光标记的细胞通过流式细胞仪进行快速的分析检测。该方法最大的好处是编码方便，可实现多种亚型DNA的检测，自动化程度相对于膜条法更高。

FISH原理

5、恒温扩增-荧光法

与PCR不同，恒温扩增其反应过程始终维持在恒定温度下，通过添加不同活性的酶和各自特异性引物来达到快速核酸扩增的目的。其中的技术原理很多，如LAMP、RPA和RCA等，环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是应用最多的技术。该技术反应快，操作简便，且具备肉眼读出的特点，目前主要用于POCT等快检领域。该方法还会持续在DNA的快速检测等方面具有更广阔的应用。关于LAMP的详细介绍，可关注后回复“LAMP技术”下载。

LAMP原理

6、HC2-HPV-DNA

HC2即二代杂交捕获。相对于一代杂交，HC2和ELISA有异曲同工之处。首先把样品中的细胞失活，释放DNA分子。释放的DNA与HPV 的RNA探针结合，并被单克隆抗体捕获。加入偶联了HRP的二抗，通过HRP催化的化学发光进行最后的信号读出。该技术由美国马里兰州的分子诊断公司Digene研发，由于不需要扩增，取样简单，污染小，可一次性检出13种高危HPV亚型，具有很高的应用价值。关于该法的具体视频介绍，可关注后回复“HC2-HPV-DNA视频”下载。

HC2-HPV-DNA

7、PCR毛细管电泳法、杂交捕获化学发光法和测序法

PCR毛细管电泳法就是利用毛细管电泳来对PCR的产物进行分析。该方法最大的缺点是无法对DNA进行分型检测。杂交捕获化学发光法相对于斑点杂交在于最后的信号读出由荧光信号转变为化学发光。测序法是利用测序仪器对DNA进行测序，目前国内主要由华大基因主导。

目前在国家药品监督管理局注册的HPV检测大多基于这些技术，其中荧光PCR法是报道最多的方法，占据了主导地位。通过关键词“人乳头瘤病毒”在国家药品监督管理局搜索得到2014年以后批准的有91个，其中荧光PCR有67个，反向杂交有7个，基因芯片、流式荧光杂交和恒温扩增的各有4家，其余方法很少采用。详细列表可关注后回复“已获批准HPV检测试剂盒”下载。

国内HPV检测技术分类占比情况

数据来源：国家药品监督管理局。关键词：人乳头瘤病毒，国产器械。

数据统计包未包含2014年以前注册。

技术原理类别	注册数量
杂交捕获-化学发光法	1
测序法	1
表面等离子谐振法	1
PCR毛细管电泳法	2
恒温扩增-荧光法	4
流式荧光杂交法	4
基因芯片法	4
PCR-反向点杂交法	7
荧光PCR法	67
总计	91

国内主要公司HPV试剂盒注册汇总

公司名称/技术原理

计数项:公司名称

计数项:技术原理

港龙生物技术(深圳)有限公司

荧光PCR法

华大生物科技(武汉)有限公司

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