流式细胞分析和免疫组化之间的比较

单独用形态学检查对淋巴瘤和白血病细分亚型往往不够，常常需要做免疫表型检查。免疫组化（IH）是为达到这一目的最常采用的技术，因为它提供了直接与形态学相关的标记，因此病理医生感到更有信心作出诊断。此外，免疫组化染色可以手工完成，而且通常不需要昂贵的设备。在存档材料上能够回顾性地进行免疫组化，也是它很大的一个优势。

在现阶段，免疫组化的应用受到能用于组织学染色的单克隆抗体的限制。经固定和包埋后，许多抗原表位已经改变，因此它们不再与可用于流式细胞仪的大多数抗体反应。免疫组化的主要缺点是它不能显示小淋巴细胞的表面免疫球蛋白，因此不能显示除了如浆细胞和免疫母细胞肿瘤等胞质丰富的肿瘤细胞外的大多数淋巴瘤中B细胞群的克隆性。

免疫组化也无法区分表面与胞质抗原。例如，胞质CD3存在于早期T细胞阶段（胸腺细胞）而表面CD3则见于成熟的T细胞阶段（外周T细胞）。当一肿瘤用免疫组化染色呈CD3阳性时，不能确定肿瘤细胞的发育阶段。NK细胞（胞质CD3阳性）和NK样T细胞（表面CD3阳性）之间的区别，同样也是如此。

此外，用免疫组化不能在相同细胞上作多重染色，也不能精确定量抗原以用于治疗监测。即使配以成像技术，也只能得到半定量结果。

最后，免疫组化的安排通常是在HE染色的切片检查完之后，因此得出结论起码要等到标本收到之后的第三天。

由于免疫组化的这些缺陷，常常需要使用流式细胞仪（FC）。用流式细胞仪，多个样本可以同时在含10个或10个以上单克隆抗体的面板上迅速处理。在一个良好的FC实验室，周转时间在3小时以内。当标本足够时，流式细胞仪为每个抗原的检查计数3000～5000个细胞。大量细胞的检查提高了FC的灵敏度和准确性，并使检测到少量的肿瘤细胞成为可能。FC能够在相同的肿瘤细胞上染多种抗原，而且可以区分表面与胞质的染色。6色流式细胞仪的使用，进一步增强了对肿瘤细胞的特征描述功能。流式细胞仪所获得的各个细胞群的百分比具有高度重现性，因此不同的实验室之间有可比性。

流式细胞术主要的缺点是缺乏与标记相关的形态学。换句话说，出现的标记可能代表正常的细胞，也有可能是肿瘤细胞。因此，对肿瘤细胞群的识别,有赖于FC中的门控技术从正常细胞中分离出肿瘤细胞。然后肿瘤细胞可以用一组单克隆抗体进一步鉴定。