化学发光假阳性本底产生的原因分析

近期收到有小伙伴提问，关于如何解决发光试剂盒研发过程中的本底偏高和假阳性问题。解决问题最重要的是了解问题产生的原因，本微信平台分类汇总了化学发光试剂产生假阳性本底的原因，由于问题本身并没有很具体的描述，因此本文也只广泛的汇总，不包含具体的项目或者方法学方面的内容。希望对大家的工作有所帮助。

抗原/抗体原料因素

• 融合表达蛋白对抗原特异性的影响。融合蛋白包含载体的一些序列，比如可以与血清中抗大肠杆菌的因子发生反应而产生假阳性。

• 合成蛋白原料错误排序或突变。合成蛋白在制备过程中，以下情况可能会导至原料特异性改变而产生假阳性：a.核苷酸发生相位改变；b.某些蛋白肽序列错误；c.核苷酸出现点突变。

• 人抗鼠抗体效应（HAMA效应）。鼠源性单抗对人体具有异种蛋白的免疫原性，因此部分假阳性反应由于人对鼠抗体反应HAMA（人抗鼠抗体效应）引起，当试剂中的阻断剂效果不理想时，检测样本就会出现高阴或假阳性。

• 抗原/抗体纯度对特异性的影响。目前原料制备的纯化工艺有限，原料中的其它杂蛋白可引起假阳性。 

人血清中的IgG  

• 正常人血清中的IgG：IgG浓度对抗体检测有较大的影响，尤其是间接法检测抗体项目。成人血样中的IgG浓度为7～16.5mg/ml，个别样本的IgG浓度会更高，这些样本检测时易显示假阳性。 

• 人血清中异常的 IgG：孕妇怀孕期间会产生特殊抗体；自身免疫性疾病易引起抗体检测假阳性，如：当患有类风湿关节炎、结缔组织病等病症时，血清中的异常IgG升高会引起本底升高或假阳性。

样本处理不当引起

• 样本中的纤维蛋白原：如果血液样本凝固不完全，血清中仍留部分纤维蛋白原，在化学发光测定过程中，磁微粒和纤维蛋白原形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成高阴或假阳性结果。

• 样本溶血：样本中红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血。当检测样本溶血时，血红细胞中的亚铁血红素具有过氧化物酶的作用，其通过吸附或者 “PP” 效应，易引起假阳性免疫反应。 

• 样本染菌：细菌污染样本时，菌体中或细菌分泌物中可能含有某些物质，会产生假阳性反应；

• 样本保存时间过长：在冰箱中保存时间过长导至血清IgG聚合，易使间接法等的试验本底加深；

操作不当

任何不符合规范的操作都会影响检测结果，因此在实验操作过程中应该严格保证操作的规范性。

严格按照仪器和试剂说明书进行实验操作是得到准确结果的关键。

全自动化学发光平台，已经大大降低了手工操作引起的各种操作问题和实验结果误差，但是仍然有一些需要注意的事项，避免引起本底的升高或者假阳性。

• 使用样本量不足的样本：当样本量不足，加样模块识别不够精密时，样本中的血红蛋白或凝胶就会被当成样本吸入加样，导至磁微粒凝集成块，造成高阴或假阳性结果。

• 洗涤不充分：稀释洗液的水应该是新鲜的纯化水，电导率小于1.2μs。如果水中含有过多的金属离子，这些离子会占用表面活性剂，影响洗涤效果。如果洗液被微生物污染，不仅洗涤效果会受很大影响，还会带来其他干扰物质。

• 加样针、反应杯等耗材：加样针、反应杯应保证干净无污染。

• 实验室环境：应注意避免84消毒液等强氧化剂消毒液影响实验反应。