NSCLC相关基因检测规范建议

NSCLC患者接受靶向治疗前进行相关靶基因检测已成为各国指南共识，所以基因检测结果的准确性很重要。因此，为保证得到高质量的检验结果，必须有一个规范的操作程序。

除了以上单个基因的检测外，通过NGS多基因检测平台，可一次性了解多个甚至几十个基因的全面信息，并能够检测到罕见的突变以及其他关键的遗传变异，可灵活、全面地鉴定治疗中可靶向的基因并了解癌症进展。患者可依据经济状况选择单基因或多基因检测。

▲基因检测的对象：

所有晚期的NSCLC 患者，在条件许可的情况下都应当进行肿瘤组织或脱落癌细胞的EGFR､ALK 突变检测，以明确靶向药物的敏感位点和可能存在的耐药情况｡对EGFR 和ALK突变阴性的NSCLC 患者可尝试进行ROS1､c-MET､RET､KRAS 及BRAF 的基因检测｡对于组织学已确诊但已无组织标本可用或已无法获取肿瘤组织或细胞学标本的NSCLC 患者，在实验室条件和检测技术允许的情况下可尝试对其循环肿瘤细胞或血中游离DNA 进行上述基因的检测｡

▲基因检测的实施条件：

基因检测的实施必须在有质量保证且必须符合中国合格评定国家认可委员会（CNAS）､医学实验室质量和能力专用要求ISO15189 或国家卫生和计划生育委员会病理质控评价中心（PQCC）的相关要求的场所内，由经过PQCC 分子病理学组组织的系统培训或经过其他有资质的培训机构培训的技能熟练的工作人员来完成，严格按操作规程并对检测全过程实施质量控制，检测所使用的试剂和相关设备应是经中国食品药品监督管理总局（CFDA）认证的产品，瘤细胞的富集工作和最终的分子病理检测报告应由病理执业医师签发并生效｡

▲标本的类型：

手术切除及经各种活检[纤维支气管镜､经皮肺穿刺活检､超声内镜引导下的经支气管针吸活检（EBUS-TBNA）等]获取的新鲜瘤组织或经4%中性缓冲甲醛液固定､包埋后的瘤组织标本均可用于EGFR 等基因检测，体液活检标本中的细胞学标本如瘤细胞数量多或经瘤细胞富集之后也可用于基因检测｡循环血中的瘤细胞及血中游离的DNA 作为无法获取组织标本的补充方式或用于追踪､评价靶向药物治疗效果为目的等，在有条件的实验室也可进行相关的基因检测，但应充分注意假阴性的可能｡

▲标本的质量控制：

（1）标本的固定：推荐应用4%中性缓冲甲醛液对活检和手术切除标本进行固定，避免使用Bouin 液等含重金属离子的固定液｡活检组织标本一般固定6 ~12 h，手术切除标本需固定6 ~48 h｡

（2）组织切片：一般需切5 ~10 μm的连续切片10 张以满足对肿瘤细胞数量的要求，应用灵敏度高的方法时可酌情降低｡切片时要有措施避免不同病例组织间的交叉污染｡操作人员（或在病理医师的指导下）尽量剔除切片中的非肿瘤组织和坏死成分，以保证包含有足量的肿瘤细胞和纯度｡甲醛液固定石蜡包埋的标本中会发生RNA 的降解，标本储存的时间越长，其RNA 获得率和纯度也会越低，应引起注意｡

目前，用于检测NSCLC 靶向药物治疗相关基因改变的方法主要有测序法（包括二代测序法）､荧光原位杂交（FISH）技术､PCR 法（扩增阻遏突变系统ARMS法等） 和免疫组织化学方法等 ｡利用较为敏感的方法（ARMS 法､数字PCR 法）也可对血液中的游离DNA进行相关基因的突变检测｡在有条件的实验室也可利用特殊设备对循环血中瘤细胞进行相关基因的突变检测｡

手术或经各种活检获取的组织及细胞学标本应首先对其EGFR､ALK 及KRAS 基因进行检测，EGFR 突变阴性的患者中可出现ALK阳性患者的富集，免疫组织化学法是筛查阳性率较低的ALK 的重要方法之一，但不能确定者仍需经其他方法再确认；无法获得组织或细胞学标本时，可采集外周血标本作为补充，建议选择较为敏感的方法检测血中游离DNA 中相关基因的改变，亦可使用专用设备对循环血中肿瘤细胞进行相关基因检测（图1）｡

NSCLC 靶向治疗相关基因检测报告的内容应包括检测的结果（包括明确的病理诊断和专业的书写）及对结果的诠释，且能够被肿瘤科医师或其他非病理专业的医师所理解｡具体内容应涵盖患者及标本的基本信息､DNA质量､检测方法､检测试剂及仪器､检测结果的相关临床意义，以及在检测过程中出现的状况及不确定结果和因素，以供临床医师全面参考｡

所有专业化分子病理检测实验室，通过建立高效率的分子检测平台，优化检测流程，从接收标本到发出报告周期，建议不超过5 ~7 个工作日，以及时满足临床的需求｡

参考来源：鼎晶生物、Tumor talk；王恩华朱明华等，非小细胞肺癌靶向药物治疗相关基因检测的规范建议，中华病理学杂志