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[分享] 谈谈新冠病毒检测试剂开发

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发表于 2020-2-14 14:02:35 | 显示全部楼层 |阅读模式

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201912月份开始,到目前为止,关于新型冠状病毒的战役还在持续进行,并未有减退的迹象。关于冠状病毒的检测,很多IVD生产企业也是达到了白热化的一个阶段。
大家知道,对于传染病的检测,在爆发初期,无疑核酸检测是应用在最前面的,此时大多数感染者尚未有抗体产生,只能通过检测病人唾液或其他样本中的病毒核酸序列来确诊。然而从前线传来的消息是不同厂家的核酸检测试剂质量良莠不齐,而且整体的检出率都很低,只有30-50%,只能借助CT联合诊断,给医生带来了极大的麻烦。而且,大多数核酸试剂的诊断时间都需要1个小时以上,无疑也是个痛点。现在疫情爆发了差不多有一个多月的时间了,大多数感染者的身体内已经有IgM甚至IgG抗体产生了,因此很多企业开始了IgMIgG抗体检测试剂的开发,这也是临床检验的趋势。
目前有很多的企业使用了各种各样的方法,我们以广州万孚和北京热景生物公司为例,大概讲一讲目前试纸条研发的基本概况。
我们知道,对于冠状病毒,有很规则的蛋白结构,S-E-M-N,对于诊断试剂的开发而言,我们就是需要在病毒身上找到这样一个抗原,可溶性很好,表达很简单,免疫原性强,相对较保守等等。我们分析4个蛋白,S蛋白是一种糖蛋白,也就是病毒身上的刺,又分为S1(含RBD)和S2,目前有个别大厂家在售(大多数厂家还未表达出来),因为它是一个糖蛋白,需要真核表达,蛋白活性跟糖基团有很大关系,所以很多厂家不想去做,因为对蛋白活性的判断很难把控;对于E(胞膜蛋白)和M(膜蛋白),水溶性很差,基本上不会有人去做;对于N(核衣壳蛋白),做的厂家最多,为什么,因为原核表达效果就很好,但是有一个问题就是,核蛋白是存在于病毒的膜内的,在感染人体细胞的时候,只有在细胞破裂时,未组装的核蛋白才有机会被免疫系统识别,而S蛋白才是最纯粹的暴露在体液环境中的,因此,理论上讲,S蛋白的作为中和抗体对应的免疫原最好,但是就是因为其重组表达活性的问题,所以大多数厂家几乎都用的N蛋白作为诊断抗原。
广州万孚公司注册的有两个产品,一个是双抗夹心检测呼吸道样本的病毒抗原,另一个时检测血清抗体。作为一个研发人员,我觉得它的第一个试剂好像有些不妥。因为目前单抗制备技术好像还达不到那么快,即使用多抗的话,想检查病毒抗原那也不是个容易的事,病毒的复制基本上都是在肺部,想通过咽拭子上的一点点样本检测出病毒蛋白,不是件易事,检出率应该非常差,有条件的可以试试。IgMIgG抗体检测才是最靠谱的。
[size=10.5000pt]201912月份开始,到目前为止,关于新型冠状病毒的战役还在持续进行,并未有减退的迹象。关于冠状病毒的检测,很多IVD生产企业也是达到了白热化的一个阶段。
[size=10.5000pt]大家知道,对于传染病的检测,在爆发初期,无疑核酸检测是应用在最前面的,此时大多数感染者尚未有抗体产生,只能通过检测病人唾液或其他样本中的病毒核酸序列来确诊。然而从前线传来的消息是不同厂家的核酸检测试剂质量良莠不齐,而且整体的检出率都很低,只有30-50%,只能借助CT联合诊断,给医生带来了极大的麻烦。而且,大多数核酸试剂的诊断时间都需要1个小时以上,无疑也是个痛点。现在疫情爆发了差不多有一个多月的时间了,大多数感染者的身体内已经有IgM甚至IgG抗体产生了,因此很多企业开始了IgMIgG抗体检测试剂的开发,这也是临床检验的趋势。
[size=10.5000pt]目前有很多的企业使用了各种各样的方法,我们以广州万孚和北京热景生物公司为例,大概讲一讲目前试纸条研发的基本概况。
[size=10.5000pt]我们知道,对于冠状病毒,有很规则的蛋白结构,S-E-M-N,对于诊断试剂的开发而言,我们就是需要在病毒身上找到这样一个抗原,可溶性很好,表达很简单,免疫原性强,相对较保守等等。我们分析4个蛋白,S蛋白是一种糖蛋白,也就是病毒身上的刺,又分为S1(含RBD)和S2,目前有个别大厂家在售(大多数厂家还未表达出来),因为它是一个糖蛋白,需要真核表达,蛋白活性跟糖基团有很大关系,所以很多厂家不想去做,因为对蛋白活性的判断很难把控;对于E(胞膜蛋白)和M(膜蛋白),水溶性很差,基本上不会有人去做;对于N(核衣壳蛋白),做的厂家最多,为什么,因为原核表达效果就很好,但是有一个问题就是,核蛋白是存在于病毒的膜内的,在感染人体细胞的时候,只有在细胞破裂时,未组装的核蛋白才有机会被免疫系统识别,而S蛋白才是最纯粹的暴露在体液环境中的,因此,理论上讲,S蛋白的作为中和抗体对应的免疫原最好,但是就是因为其重组表达活性的问题,所以大多数厂家几乎都用的N蛋白作为诊断抗原。
[size=10.5000pt]广州万孚公司注册的有两个产品,一个是双抗夹心检测呼吸道样本的病毒抗原,另一个时检测血清抗体。作为一个研发人员,我觉得它的第一个试剂好像有些不妥。因为目前单抗制备技术好像还达不到那么快,即使用多抗的话,想检查病毒抗原那也不是个容易的事,病毒的复制基本上都是在肺部,想通过咽拭子上的一点点样本检测出病毒蛋白,不是件易事,检出率应该非常差,有条件的可以试试。IgMIgG抗体检测才是最靠谱的。
结合垫
T1
T2
C
1
鼠抗人IgM /IgG
N-Pro
/
羊抗鼠IgM /IgG
2
N-Pro
抗人IgM
抗人IgG
N-Pro Ploy Ab
3
N-Pro
N-Pro
/
N-Pro Ploy Ab

[size=10.5000pt]第一种一般是做单独的IgMIgG检测时使用,由于不能同时检测,故用的人不是很多;
[size=10.5000pt]第二种是第一种方法的改进,优点是可以同时检测IgGIgM
[size=10.5000pt]第三种是热景最近新开发的双抗原夹心检测总特异抗体,效果不是很清楚。

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发表于 2020-5-28 09:22:23 | 显示全部楼层
楼主说的确实,层析测试的话,目前还是测血液中igm和igg靠谱一些~咽拭子取样的问题在以前sars那会就有人做了数据统计,确实漏检较多
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