新型冠状病毒“居家自测”试剂大揭秘——阻断剂篇

随着奥密克戎变异株在中国多省市疯狂席卷，新冠疫情的紧张气氛再度升温。为了进一步优化新冠病毒检测策略，服务疫情防控需要，国务院于3月10日紧急颁布《新冠病毒抗原检测应用方案》，在核酸检测基础上，增加抗原检测作为补充。

目前获批的产品都是基于侧向免疫层析技术进行开发的。小小一张试纸条从可见的硬件到肉眼不可见的试剂，都蕴含着缜密的设计和高品质的原料。解构侧向层析检测各个部件，大致可分为如下四类：侧向层析膜材、检测系统标记物、抗体及辅助试剂。

“居家自测”因为需要使用者自行判断结果，避免假阳性、假阴性结果带来的困扰是体现新冠抗原试剂高质量的重要指标。这些假性结果主要来自于免疫测试中的非特异性结合，其中包括(1)固相材料和非目标蛋白结合;(2)病人样本中存在的内源性抗体和检测试剂抗体的非特异性结合。

固相材料封闭

为了防止非特异性结合，在固相材料包被之后需添加封闭缓冲剂中以封闭固相材料上任何剩余未结合的位点。在准备检测样本的过程中需使用阻断剂以防止内源性干扰抗体与检测试剂组分抗体结合。

理想封闭剂具有以下特征：

• 有效地阻断测定反应物非特异性结合到固体材料表面

• 不影响已包被到固体材料表面的试剂有效成分

• 可以起到试剂有效成分在固相表面稳定剂（防止变性）的作用

• 不与其它试剂有效成分发生交叉反应

• 不具有酶活性并由此可能与试剂中的底物反应而使信号加强或降解试剂中的反应物

• 每个批号批间差小

理想的封闭剂通常为蛋白质，因为它能够有效地封闭固相材料表面疏水性和亲水性位点。此外，它可以作为一种稳定剂用以防止蛋白在与固相材料的表面反应时发生变性。封闭剂的用量和使用时间必须根据每个检测方法进行优化。封闭剂的用量不足将导至过高的背景信号以及减小的信噪比。而使用浓度过高的封闭剂则可能掩盖抗体 - 抗原相互作用，从而也可引起信噪比的减小。

未添加封闭剂

添加封闭剂

免疫检测干扰阻断

潜在的干扰因素包括内源性抗体或病人样本中的其它结合蛋白，多反应抗体，自身抗体和人抗动物抗体。在免疫检测时，干扰物可通过非特异性结合来干扰抗体和分析物之间的反应，一方面抑制目标分析物与检测抗体的结合，产生假阴性，另一方面又可以在缺少目标分析物的情况下与捕获和检测抗体结合，从而产生假阳性。

1. 异嗜性抗体干扰：

指能特异性的结合某类动物的抗体而造成错误的结果。最常见的异嗜性抗体是HAMA（Human Anti-mouse Antibody）抗体。此种抗体引起的干扰反应在免疫检测中经常发生其发生率在10％左右。在曾经接触过或接种过鼠抗体的个体中，其体内会存在人抗鼠的抗体。当免疫检测时所采用的一抗和二抗都是鼠抗体时，HAMA血清样本中所含有的人抗鼠的抗体，也可与一抗和二抗结合，从而影响血清样本的正常双抗夹心反应造成错误的检测结果。

2. 类风湿因子干扰

部分类风湿关节炎、各种胶原结缔组织病、肝病以及多种慢性疾病病人体内会出现的一类自身抗体，可与自身IgG分子的Fc段抗原决定簇起反应，该类抗体被称为类风湿因子（rheumatoid factor，RF）。其中部分类风湿因子识别人与动物的IgG的共有抗原决定簇，因而能引起交叉反应，在双抗体夹心法及捕获法中导至错误结果的产生。

对应的解决方案可通过在样品稀释液中加入主动/被动阻断剂，使其与产生干扰的抗体充分结合，从而阻断其与检测用的捕获抗体或标记抗体的结合。

被动阻断：加入异种动物的IGG抗体，通过竞争性结合干扰抗体，从而阻断非预期结合。

主动阻断：加入某种能够特异、主动、高效的中和干扰抗体的成分，从而阻断非预期结合。

此次我们对新冠抗原自测试剂重要组分之一——封闭剂、阻断剂的分类、选择先讲到这里，想要了解更多默克封闭剂、阻断剂产品信息，可参阅如下产品清单。