关于核酸检测PCR法……你拍过照吗？

检测有假阴性，可能测不出来，必须用ct诊断等等……小妖收到的留言很多，绝大多数来自于无医药学背景的人。如何让民众明白这个问题……小妖和个别患者家属沟通后，简单说两句。

1. 小妖本人在分子实验室待过一年，核酸检测DNA不是这次的RNA。我不是生物技术专业的，是药学专业毕业的。这个操作是需要进行培训的。作为同类专业背景的我，当时培训了两周才上岗的。我今天只说DNA的。因为我没有检测过RNA。
   

2. 实验流程很简单。不管是唾液、血液……反正是样品，然后提取其中目标的DNA，因为可能提取到的DNA片段很少，所以进行PCR扩增。也就说，把获得的基因片段扩增一百万倍之类的……不停地复制。然后和对照品一起比较，看看序列是不是。如果是，就是阳性。在图谱上，差异是非常大的。

3. 所有核酸检测试剂盒肯定是出现在病毒之后。不可能未卜先知。因为没有目标，你怎么提取可能的病毒RNA片段？因此很多患者说，为什么平时不多做一点，满足需求。这个是违背科学逻辑的。如果你知道亲子鉴定，亲自鉴定的前提是，你知道人类的基因序列是什么，然后有了父亲的样本，还需要儿子，不然你和什么去比较？也就是说，如果有一滴血，你不知道是鸡鸭鱼肉的，还是人的。那就必须知道人类的基因特征序列是什么，然后提取这滴血里的目标基因，PCR扩增。明确是人之后，看看亲人样本，是不是父子关系。

4. 有人说，扩增就是给基因片段装拉链头，再复制。一条拉链（如果是双链），一拆二，变成两个半条，然后根据这个半条就装上另一侧的半条。一个过程，一条就变成了两条。所谓的一圈，就是一个过程，一条变两条。1变2，2变4，4变8……一般是30圈。拉链头很重要，如果不对，就不可能匹配上合适的拉链。人的基因和羊的不一样，你怎么判断是人血？就是这样啊。因此必须新冠病毒出现，得到了单纯的病毒序列，我们才知道拉链头是什么，才能取拆分样品里的拉链，把一点点的样品变成一百万倍……如果序列不对，拉链头不对，基本也就扩增不出来了，第一条就装不上。你问单链的怎么办？很简单，就是一半的拉链，先匹配，做成一条完整的拉链，再一拆二，二变四……比如mRNA反转录成单链cDNA之后做PCR，产物是双链DNA。
   

5. 因此，不可能在病毒出现之前，就有这个病毒的检测试剂盒。因为你没有拉链头……也不知道应该提取哪些目标基因，一滴血给你，都不知道怎么处理。

6. 但是，检测手段是常规手段，核酸检测手段不是一个新创造的手段。也就是说，你拍照不好看，你不能说是摄影技术是有问题的。但从第四点你能看到，每扩增一次都需要时间，而且依赖PCR设备（其实就是一个金属加热器，可以设定每个温度几分钟的那种。里面有很多孔，一次性可以放好几个样品，因为要剃度稀释。）因此小妖非常希望快速试剂试纸之类的能推出，类似于验孕棒那种。现在的方法占用设备，时间，需要经过培训的专业人手。现场、快速检测产品势在必行了，当然了，这不容易。一旦做成，时间，人力物力都省，而且可以上门排查。

7. 假阴性的造成的原因有很多

   没有取到合适样品。这点我深信。因为一开始我们并没有意识到，部分轻症患者口腔里没有，需要取深度痰液，也没说粪口消化道传播，一开始很多检测取样，并没有肛门样品。这是基于我们对于这个疾病的认知。所以你不能说，七次检验都是阴性，最后肛样品是阳性，这是检测手段的问题。如果你取景，现场就没有樱花，你怎么指望照片里有樱花？

   样品处理的专业度。人体的样品是复杂的。小妖个人检测DNA的经验里，样品处理是需要专业度培训的。因为血液、痰液等等，有很多蛋白质，有些操作可能让提取到的样品不纯，有很多干扰因素。类似于你拍照，照片里可能有你，但你在火车站检票口……背景不干净，可能需要重新取样。当然，还有操作不当，导至目标样品破坏的。这个不是检测手段的问题，是处理手法，专业人士的操作问题。因此我非常支持大规模招募技术人员，并且增加检测公司加入。

   公用设备污染。这个在实验室常见。因为每个样品都要使用到水浴加热、PCR设备等等，有时候离心管密封没按好，导至“烤干了”，样品溶液蒸发，污染整台设备，但技术人员没有发现。这个在工作压力极大，设备和人员满负荷运转的时候是可能发生的，我表示理解。排除这些问题，可能就是复检，样品检测两次等等。

   有人质疑敏感度的问题。其实很多人把化学检测的一些概念代到了生物技术手段。怎么说呢，你可以多扩增几圈……小妖以前偷懒，规定要扩增35圈的，我可能就扩增28圈，因为如果是阳性，样品量够，2倍的28次方就绝对够看出来了，这样能省时间……换句话说，我只接受着急了，这种说法。不存在取到样品，扩增2的35次方，然后看不到样品的，然后跟我说敏感度的问题……说化药HPLC是有多少个ppm……你见过检测化学品，扩增，让样品变多的吗？但你现在问我，这个敏感度是百万分之多少？

   引物序列可能不对？我相信我们分离了新冠，并且测序了。不然的话，现在就没有对照序列，也就说，很可能一例都检测不到。但各个公司的探针、引物可能存在不同。这个小妖不能乱说，因为我没看到，也没有比较过。大家选择的片段是不是都一样，这个……理论上应该没有问题的。除非是大数据说明，有一个品牌的试剂盒一个都没测出来，那么他们的家试剂盒有问题。这种问题是系统性问题，有问题就是全部，不可能一两个，一部分能做，一部分不行。

   试剂盒的贮存。我不想再去追究什么捐赠物资处理……但话是实话。为什么2-8摄氏度保存，总是有道理的，毕竟都是氨基酸。

   试剂盒稳定性。和上一个问题有一点类似，就是试剂本身会不会在特殊情况下，温度不适宜的情况下出现问题。一个实验室，都是露天放着，有点还能用，有的试剂盒本身的一些氨基酸出了点问题。
   

8. 把CT和核酸检测成功率做对比

   这个做法基本就是无事生非了，还连累了几位一线医生。CT影像学，他怎么确定是哪种病毒感染？其实影像学和核酸检测应该是相辅相成的。部分轻症，无症状可能在CT上看不出来，也或者有其他肺炎、基础疾病的，拍CT分不出来是不是新冠感染。而核酸检测，确实无法判断肺部病灶的痊愈也或恶化的情况。这两种手段本来都没有问题，都是成熟的，但被部分一知半解，也或另有所图的人利用了，非得比较。事实上，你就是一个普通的感冒、骨折，怎么判断好不好？可能验血，验尿，拍片……综合后才能告诉你，有没有感染，同时伤口愈合得怎样了，能不能出院。

9. 所以……你拍不出好看的照片，也许一开始取景地里没有好看的花，一开始角度就不对，处理不当，曝光过度了，一开始就背景太糟乱，一开始胶卷就受潮了……照片只能告诉你，平面影像是这样的，他无法告诉你照片里的两个人是不是父子……但你不能说，摄影技术的发明有问题，是骗子。

我希望我说了一些非该专业人士听得懂的话。