论文分享：GENEYE® ERA疟疾检测试剂盒在亚马逊的实战验证

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论文分享：GENEYE® ERA疟疾检测试剂盒在亚马逊的实战验证

标题：Novel isothermalnucleic acid amplification method for detecting malaria parasites

发表期刊：Applied Microbiologyand Biotechnology

研究机构：Fundação Oswaldo Cruz(Fiocruz)等

原文链接：https://doi.org/10.1007/s00253-024-13357-2

核心发现：在巴西亚马逊地区的疟疾现场筛查中，ERA法与nPCR（巢式PCR，金标准）的阳性符合率高度一致，展现出优异的敏感性和特异性，整体检测时间仅需25分钟以下，在资源匮乏的现场诊断中表现出了极强的实用价值。

                              

本研究旨在评估和验证GENEYE® ERA疟原虫检测试剂盒在巴西流行区作为远程实验室检测工具的潜力。以巢式PCR（nPCR）为金标准，nPCR、显微镜检查、快速诊断试验（RDT）、定量PCR（qPCR）和ERA检测的疟原虫流行率分别为21.7%、18.8%、19.2%、21.7%和21.7%；以nPCR为标准，qPCR和ERA的灵敏度均为100%。整体数据显示，GENEYE® ERA疟原虫检测试剂盒为传统疟疾诊断方法提供了一种有前景的替代方案，其高灵敏度、高特异性、处理速度快且操作简便，使其成为有价值的即时检测工具，尤其适用于资源有限和偏远的疟疾流行地区。该试剂盒的特点可归纳为：在低基础设施的即时检测环境中可实现准确检测；其灵敏度和特异性达到或超过对照方法；无需DNA纯化，在25分钟内即可检出疟原虫。

一、研究背景与设计

疟疾仍是全球重大公共卫生问题。2022年全球估计2.49亿例病例，60.8万人死亡。在疟疾流行地区，显微镜镜检和快速诊断试纸（RDT）虽最常用，但镜检依赖专业人员与良好实验室条件，RDT灵敏度有限，易漏检低密度感染者。

为在资源匮乏的现场部署分子诊断工具，研究团队在巴西亚马逊地区三个疟疾高发区（Acre州的Cruzeiro do Sul和Mâncio Lima，以及Amazonas州的Guajará）开展横断面队列研究，共招募323名当地居民。每位参与者同时接受五种方法检测：显微镜镜检、RDT、巢式PCR（nPCR，金标准）、定量qPCR，以及先达基因的GENEYE® ERA疟疾检测试剂盒。

二、三大核心技术组合

GENEYE® ERA检测体系的底层技术架构包含三大核心技术：

1. 恒温扩增技术：在恒温条件下将痕量核酸模板扩增到可检出水平；

2. 冻干工艺驱动的常温储运：在37-42℃恒温条件下即可将痕量核酸模板扩增到可以检出的水平，摆脱了对精密温控设备的依赖。

3. 核酸快速释放技术：样本无需繁琐的DNA纯化步骤，可直接参与反应。

三、临床结果：在现场实战中对标金标准

1. 检测限（LoD）评估

ERA试剂盒对恶性疟原虫和间日疟原虫的95%检出限分别为2.90和2.25个寄生虫/μL血液，远低于镜检的检测下限。

2.对疟原虫属的检测性能

ERA试剂盒与qPCR均实现100%的敏感性和特异性，无任何假阴性或假阳性，与nPCR结果完全一致。镜检和RDT分别漏检9例和8例，敏感性仅为87.14%和88.57%。Kappa值显示ERA与金标准达到完美一致性，而镜检和RDT分别为0.91和0.92。

3. 对恶性疟原虫的检测性能

ERA试剂盒同样实现100%的敏感性、特异性及Kappa=1.0，完美检测全部32例真阳性。镜检和RDT分别漏检1例和2例，敏感性为96.88%和93.75%。

4. 对间日疟原虫的检测性能（亮点）

ERA试剂盒仍保持100%的敏感性和特异性，真阳性38例，与nPCR完全一致。而qPCR和镜检仅检出30例真阳性，敏感性均仅为78.95%；RDT检出32例，敏感性84.21%。ERA能够额外检出8例被qPCR漏掉的低密度间日疟感染，对亚显微感染的卓越捕捉能力。

5. 亚显微感染检出能力

研究列出9例被镜检和RDT完全漏检的无症状亚显微感染个体，其中1例为恶性疟原虫，8例为间日疟原虫。值得注意的是，在8例间日疟中，qPCR也未能检出（显示为阴性），而ERA试剂盒与nPCR一致，全部检出阳性。

四、总结与展望

在亚马逊热带雨林环境中——电力供应不稳定、温度湿度波动剧烈、样本运输与储存条件简陋——GENEYE® ERA试剂盒依靠冻干常温储运体系和简易操作流程，依然实现了完整的研究取样和检测。这意味着ERA技术已经超越了“实验室验证”阶段，真正具备了在全球医疗资源匮乏地区大规模部署的可靠性。

更进一步看，ERA技术的突破在于：以恒温体系代替热循环、以冻干工艺代替冷链运输、以一步法样品前处理代替繁琐的核酸纯化，在保留实验室级检测准确度的同时，将技术适配到了最艰难的现场环境中。从巴西疟疾到结核病防控，从登革热筛查到呼吸道病原体检测——ERA技术提供了这样的可能性：在任何一个需要快速精准诊断的角落，分子检测不再是一个“只能在实验室完成的选项”。

ERA试剂优势

先达基因核酸扩增试剂盒的显著优势在于：无需 PCR 升降温，适配基层简单温控设备；全程恒温，性能可靠，10~15分钟内即可完成扩增；可预制封装成微球，即拿即用、批量生产、重复性好。      

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