PMA耳部水肿模型_佛波酯使用方法｜MCE

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Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一种佛波酯，是蛋白激酶 C (PKC) 和 SphK 的激活剂。

Phorbol 12-myristate 13-acetate 是 NF-κB 激活剂。Phorbol 12-myristate 13-acetate 可诱导 THP-1 细胞分化 (已经经过 MCE 专业的生物实验验证)。

目录号： HY-18739；CAS No. ： 16561-29-8

别名：佛波酯； PMA; Phorbol myristate acetate

Phorbol 12-myristate 13-acetate

01 佛波酯 Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 耳部水肿造模方法

Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 可用于构建耳部水肿模型[8][9]。

请勿仅参考一篇文章来确定实验条件。建议在正式实验前，通过预实验确定最佳实验条件 (动物品系、年龄、剂量、频率及周期、检测时间及指标等)。

1. 诱导可预防型耳部水肿模型[8]

致病原理

PMA 可诱导由蛋白激酶 C (PKC) 介导的明显炎症反应，特别是激活 PLA2 来引发炎症。

具体造模方法：

小鼠：Swiss 小鼠 • 雌性 • 25-30 g
给药方式：100 μg/mL • 取 20 μL 局部应用于单耳 • 单剂量

Note

先给药后造模 。应于 PMA 处理前 1h 给药抑制剂 Hydroxyachillin。

造模成功指标

外观监测：左右耳厚度差异明显增大。
指标变化：血管通透性增加。

拮抗产品：Hydroxyachillin; Indomethacin (HY-14397)

2. 诱导可抑制型耳部水肿模型[9]

致病原理

PMA 可诱导由蛋白激酶 C (PKC) 介导的明显炎症反应，特别是激活 PLA2 来引发炎症。

具体造模方法：

大鼠：Wistar • 雄性 • 成年大鼠 • 200-220 g
小鼠：Swiss 白化病 • 雄性 • 25-30 g
给药方式：局部应用于单耳 • 2.5 μg，20 μL • 单剂量

Note

探究抑制型产品的抗水肿作用，应在处死小鼠前4小时进行处理。

造模成功指标

外观监测：左右耳质量差异明显增大。
指标变化：刺激巨噬细胞产生超氧阴离子。

相关产品：Carrageenan (HY-125474); Histamine (HY-B1204); Serotonin (HY-B1473A); Prostaglandin E2 (PGE2) (HY-101952)

佛波酯 Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 耳部水肿造模参考文献

[8]. Silván AM, et al. Inhibition by hydroxyachillin, sesquiterpene lactone from Tanacetum microphyllum, of PMA-induced mouse ear oedema. Inflamm Res. 1996 Jun;45(6):289-92.

PMID: 8814460 DOI: 10.1007/BF02280993

[9]. Kaur G, et al. Antiinflammatory evaluation of alcoholic extract of galls of Quercus infectoria. J Ethnopharmacol. 2004 Feb;90(2-3):285-92.

PMID: 15013194 DOI: 10.1016/j.jep.2003.10.009

02 PMA诱导 THP-1 细胞孵育分化成巨噬细胞样细胞 (THP-1 巨噬细胞)

PMA (100, 200 ng/mL；1-5 天) 诱导 THP-1 细胞孵育分化成巨噬细胞样细胞 (THP-1 巨噬细胞)，从而导至形态变化，即贴壁样的巨噬细胞样表型，且细胞表面 CD11b 表达增加[3][5]。
注意事项：
1. THP-1 倾向于高密度生长，需要偏高的密度维持较好的细胞状态，一般1:2 半换液或者补液来传代，少离心，尽量使用高质量血清。
2. 传代次数、细胞状态、细胞密度都可能会影响诱导效果。必要时请调整细胞状态至较好时开展实验 (细胞形态饱满，大小均一，折光性较好， 为悬浮生长单个细胞)。
3. PMA 使用时请注意避光储存 ，配成 DMSO 母液后分装冻存，避免反复冻融。
4. 如何判断实验成功：最直观的就是细胞由悬浮生长变成贴壁生长。

PMA (20 ng/mL，36 小时) 通过激活 PKC-δ/Syk/NF-κB 介导的 Thy-1 上调来抑制内皮细胞迁移[7]。

参考文献

[3]. Schwende H, et al. Differences in the state of differentiation of THP-1 cells induced by phorbol ester and 1,25-dihydroxyvitamin D3. J Leukoc Biol. 1996;59(4):555-561.

[5]. Starr T, et al. The phorbol 12-myristate-13-acetate differentiation protocol is critical to the interaction of THP-1 macrophages with Salmonella Typhimurium. PLoS One. 2018;13(3):e0193601. Published 2018 Mar 14.

[7]. Heng-Ching Wen, et al. PMA inhibits endothelial cell migration through activating the PKC-δ/Syk/NF-κB-mediated up-regulation of Thy-1. Sci Rep. 2018 Nov 2;8(1):16247.

03 诱导 THP-1 细胞分化的 Protocol 有吗？

(1) 将 THP-1 细胞接种在孔板中 (密度为 5 × 10^5 cells/mL)，加入 PMA (浓度为 50-200 ng/mL)，处理细胞 24 h 以诱导分化。

(2) M0 静息巨噬细胞的极化在用 PMA 处理细胞 24 h 后，用无血清培养基洗涤分化的贴壁细胞两次，然后在无 PMA 的培养基中静置 24 h，以获得 M0 静息巨噬细胞。

(3) M1 经典激活巨噬细胞的极化在用 PMA 处理细胞 24 h 后，用 100 ng/mL LPS 和 20 ng/mL IFN-γ 共培养细胞 24 h，以获得经典激活的 M1 型巨噬细胞。

(4) M2 替代激活巨噬细胞的极化在用 PMA 处理细胞 24 h 后，用 20 ng/mL IL-4 和 20 ng/mL IL-13 共培养细胞 24 h，以获得替代激活的 M2 型巨噬细胞。