Western Blot抗体保存指南｜分装避坑延长3倍寿命

心中u你

关于WB抗体的保质期，没有一个绝对统一的答案，因为它受到多种因素的影响，本文将系统阐述影响抗体稳定性的关键因素，并提供基于行业共识的最佳保存实践指南，以最大化抗体效能和使用寿命。
一般范围

未开封抗体 (根据储存条件):

• 液体抗体 (通常在 -20°C 保存): 生产商标注的保质期通常是 1-2年。在严格遵循储存条件（-20°C或-80°C），避免反复冻融的情况下，很多抗体实际可以稳定保存 3-5年甚至更久，尤其是冻干粉形式的抗体。
  
• 冻干粉抗体: 在干燥、避光、4°C或-20°C保存时，通常稳定性更高，保质期更长，5年或以上很常见。复溶后则按液体抗体对待。
  

已开封抗体 (分装后保存):

• 在严格遵循分装和储存规范情况下，开封并正确分装储存的抗体，通常可以稳定使用 6个月到2年。
  
• 强烈建议：开封后立即进行小量分装（如10-50µl每管），避免反复冻融主库存。 每次实验使用一个分装管。
  

关键影响因素 (决定实际能用多久)

储存温度:

• 长期储存: -20°C 或 -80°C 是最常用的。-80°C 通常能提供更长的稳定性，尤其对于珍贵的或容易降解的抗体（如磷酸化抗体）。
  
• 避免反复冻融: 这是导致抗体失活的最主要原因之一！反复冻融会破坏抗体蛋白的结构。小量分装是避免此问题的根本解决方案。
  
• 抗体稀释液: 稀释后的抗体通常非常不稳定，应现用现配，切勿长期保存稀释液（即使放4°C也不推荐超过几天）。
  
• 短期存放/添加甘油: 对于频繁使用的抗体（比如几周内会用多次），可以在抗体溶液中加入等体积的甘油（最终浓度~50%），然后保存在-20°C。甘油能防止溶液完全冻结，允许在-20°C下仍呈粘稠状，便于取用少量而不需反复冻融整个分装管。但长期（数月以上）还是建议纯液体分装存于-20°C或-80°C。
  

防腐剂: 大多数商业抗体会添加防腐剂（如0.02-0.05%叠氮化钠或ProClin™）来抑制微生物生长。开封后，防腐剂的作用会减弱，无菌操作和避免污染就很重要。不含防腐剂的抗体开封后稳定性更差，必须严格分装和无菌操作。
抗体类型:

• 单克隆抗体: 通常比多克隆抗体更稳定，批次间差异小。
  
• 多克隆抗体: 是不同抗体的混合物，稳定性可能稍差，不同批次间也可能有差异。
  
• 特殊抗体: 某些修饰特异性抗体（如磷酸化、乙酰化抗体）可能对降解更敏感，需要更严格的储存条件（如-80°C）。
  

污染: 取用抗体时，枪头接触到其他物质或未严格无菌操作，会引入细菌或蛋白酶，导致抗体快速降解。务必使用无菌枪头，避免直接接触管壁或溶液。
物理状态: 观察抗体溶液，如果出现浑浊、沉淀、絮状物（非正常聚集），或者颜色发生明显变化，通常表明抗体可能已降解或污染，应避免使用。
最佳实践建议

1. 仔细阅读说明书: 最重要！ 生产商会在产品说明书上提供推荐的储存条件和复溶方法（对冻干粉），以及他们测试确认的保质期。这是最权威的依据。
2. 立即分装: 收到抗体后（尤其是液体抗体），或冻干粉复溶后，第一时间按每次实验用量进行小量分装。使用无菌、无核酸酶/无蛋白酶的低吸附离心管。
3. 标记清晰: 在分装管上明确标记抗体名称、浓度/货号、分装日期。
4. 严格温度管理:

• 主库存和未使用的分装管保存在-20°C 或 -80°C。
  
• 频繁使用的分装管，如果加了甘油，可放-20°C；否则也应尽量减少冻融次数。
  
• 绝对避免长时间置于4°C或室温（除非正在实验中使用）。
  

5. 避免污染: 取用抗体时使用无菌枪头，操作快速，避免溶液在室温暴露过久。
6. 定期验证: 对于存放较久的抗体（尤其开封后超过1年），在使用前用已知的阳性对照样品跑一次WB，验证其效价是否满足实验要求，以实际效能而非标注日期作为使用依据。
简单来说，做好分装并严格保存在-20°C以下，大部分抗体在开封后至少能稳定使用一年。 但为了实验结果的可靠性，对于存放较久的抗体，每次使用前最好用阳性对照验证一下效果。


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