磁珠法核酸提取，这些问题你遇到过吗？避坑指南请收下

二维码

在核酸检测过程中，磁珠法核酸提取因检测灵敏度高、操作可自动化、高通量、安全和快速等特性，被广泛应用。但在核酸提取过程中，需要注意的细节较多，一处出错都会导致结果的失败，下文帮大家整理出了一些常见问题并进行解答，希望对你会有帮助。
1、
增加磁珠的用量，可以改善核酸提取效率吗？
在提取效果不佳的时候，有人会认为增加磁珠的用量，就能吸上更多的核酸，提高核酸提取量，但其实这种方法很难达到目的。
磁珠用量过多，会导致其无法均匀分散到各步溶液体系中，降低其分散性，导致吸附、洗涤和洗脱过程的不彻底。过量的磁珠也会吸附更多的杂质，磁珠表面没有结合核酸的位点，会给杂质的结合提供更多机会。一般情况下，磁珠法核酸提取试剂盒中给出的磁珠用量都足够满足大家常见的应用场景，如果遇到核酸提取收率低的问题，需要对裂解结合、清洗和洗脱过程等方面充分考虑。
2、
如何避免核酸提取过程中核酸降解？
每个步骤都要注意充分的混合均匀，避免团块的残留影响实验结果；在洗脱时，时间过长或者温度过高，核酸有可能会降解；样本切记不可反复冻融，提取的样本要注意在合适的温度保存，长期保存尽量 -80 ℃。
3、
样品裂解效果不好，能否通过增加裂解液使用量，改善裂解效果并提升提取效果？
对于磁珠法而言，每增加一部分液体体积，就减少了更多的磁珠碰撞几率，而降低磁珠碰撞几率，会导致吸附率的大幅度下降。所以很多时候，虽然增加裂解液和洗涤液确实能够起到增强裂解和增强洗涤的作用，但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率，无法保证磁珠碰撞效率是不能保证核酸提取效率的，所以单纯增加试剂使用量改善提取效果并不一定完全有效。
4、
核酸提取纯度不高，有蛋白或盐残留，是否清洗次数越多越好？
核酸提取纯度不高，可适当增加一到两次清洗次数。如果清洗次数过多，会增加清洗过程中的核酸损失量。一般情况下，清洗次数在2-4次为宜。
5、
增加提取的样品量，是否可以增强提取效果？
在样本核酸含量高，裂解液可充分裂解的范围内，增加样本量可以增加提取效果。但对于核酸含量低的样品，增加样品量反而会引入更多的杂质，降低最终核酸提取的质量，对于这样的样品，建议在前处理先经过富集或者浓缩步骤再开始提取。或者增加裂解的完全性，使更多的核酸暴露出来。
6、
为什么原本效果很好的磁珠，换了一个试剂盒效果就降低了？
磁珠的种类是多种多样的，粒径大小不同，分散性不同，磁响应时间不同，包被基础基质不同，外层修饰官能团不同，包被密度不同，官能团臂长不同，会导致磁珠特性差异很大。
所以不同磁珠所适应的实验和体系也是不同的。在原有体系中表现优异的磁珠，是经过一系列筛选和方法摸索后，筛选出的最佳组合。如果将磁珠换入新的体系，出现提取效果降低也很正常。多数情况下，磁珠和试剂体系都要做一定时间的配合调整。
7、
提取效果不如某种试剂盒，就是磁珠不好吗？
很多用户在筛选磁珠过程中都是在已经成熟试剂体系下，简单地等量替换磁珠，用于比较磁珠效果。这样就会很容易得出某种磁珠效果不好的结论，但实际上，由于不同磁珠适合的体系和用量是不同的，往往需要调整过后才能获得更好的提取效果。
总而言之，在使用磁珠进行核酸提取时，合适的磁珠，才是最好的磁珠。新纵科的硅羟基磁珠、硅羧基磁珠两款产品，就是为适应不同样本、不同体系而研发，同时新纵科可以提供专业推荐与技术支持。若感兴趣，欢迎联系！



原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/568655959