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多重PCR技术是在常规PCR基础上改良而来的一种扩增技术,它是在同一反应体系中加入两对以上的引物,从而扩增出多个核酸片段,弥补了常规的PCR只能用一对引物扩增一个核酸片段的缺点。多重PCR技术根据这个优点,可以检测单一的食品病原细菌,也可以同时检测多种食品病原细菌。
(1)检测单一病原细菌
如我们目前了解到进食含有副溶血性弧菌的食物可以引起食物中毒,一般副溶血性弧菌常常来源于海产品、海水产品等食品当中。在副溶血性弧菌的快速检测与鉴定的多重PCR检测过程中,就常利用副溶血性弧菌的三种毒力基因的引物,如不耐热的溶血素tlh、耐热直接溶血素tdh和相对耐热直接溶血素的trh基因,将这些引物都放在同一反应体系下,不仅可以快速鉴定菌株,还可以快速区分产毒菌株和非产毒菌株。
(2)检测多种病原细菌
在同一反应体系下,同时加入多种病原菌的特异性引物进行多重PCR扩增,可以实现对多种病原菌同时检测与分析。但值得注意的是,在多重PCR检测多种病原菌时,需要对食品检测病原菌进行增菌操作,以便满足样品检测的敏感性要求。
多重PCR技术相比于常规PCR技术具有更加特异性强、简单快速等优点,但也不可避免因易受污染、扩增产物选择不当、实验条件控制不好的缺点,从而导致实验结果不理想。
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