qPCR和WB结果不一致！？师兄告诉你怎么办！

MDL

在科研中，我们常常期望在理想情况下从不同角度、用不同实验来论证同一件事。然而，实际情况是实验中的影响因素繁杂，导至有时得不到理想结果，不同实验的趋势也不一致，这确实让人颇为苦恼。

遇到这种情况不要慌，我们来仔细分析原因。

其一，这次的结果是否可靠？有没有进行重复实验？要知道，每次实验都是一次抽样，难免出现各种误差。像检测前样品没充分混匀、WB 曝光时曝光液没淋匀等，都可能造成趋势差异。重复实验虽折磨人，但不可或缺。

其二，从中心法则来看结果不一致的原因。基因转录出 mRNA，mRNA 再翻译为蛋白质，蛋白质执行生物功能。一般 mRNA 的水平和蛋白质的水平应是一致的，但若不一致，可尝试这样分析：

• 延迟效应：蛋白质合成需要时间，而 mRNA 的表达能更快响应刺激，从而导至变化时间差。

• mRNA 的可变剪接：转录后的 mRNA 可能有多种剪接体，而 qPCR 可能只针对其中一段，可能 mRNA 水平降低但其他剪接体增加，进而使蛋白水平升高。

• 负反馈：细胞内存在平衡，蛋白水平高可能抑制转录，导至 mRNA 因负反馈而下降，反之亦然。

• 蛋白翻译的调节：可能 mRNA 水平不变但翻译增强，导至蛋白量增加；或者有影响翻译的因素导至 mRNA 高而蛋白低。

• 蛋白翻译后的稳定性：蛋白翻译后的修饰如泛素化增加会使其通过蛋白酶体途径降解，导至蛋白水平下降。

总之，当不同实验结果不一致时，要牢记中心法则，思考最终起作用的是蛋白质，尝试分析原因，让我们的机制研究更严谨丰富。