手把手教你做小鼠蛛网膜下腔出血的穿刺模型

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[color=var(--weui-LINK)][url=]蛛网膜下腔出血[/url]（subarachnoid hemorrhage，SAH）分自发性与创伤性SAH，其中75～80%的自发性SAH是由于颅内动脉瘤破裂引起。虽然SAH只占脑卒中的5%，但由于其高病死率，且患病平均年龄仅为55岁，因此，SAH是严重威胁人类健康的疾病之一。

一、动物的选择

雄性 C57BL/6 品系 SPF 级小鼠。

二、SAH动物模型制备

动物模型采用颈内动脉穿刺的方法，并对SAH模型的严重程度进行评分，评分≤7分的小鼠将排除在本研究之外。

具体步骤：1.0%戊巴比妥钠溶液按照40mg/kg [color=var(--weui-LINK)][url=]腹腔注射[/url]，待麻醉满意后（角膜反射消失、刺痛鼠尾时无反应），[color=var(--weui-LINK)][url=]备皮[/url]，仰卧位固定，1%碘伏消毒，用眼科剪刀在颈部[color=var(--weui-LINK)][url=]前正中线[/url]直行剪开约2.5厘米皮肤，钝性分离皮下，并用拉钩将皮肤牵至左侧，固定，暴露[color=var(--weui-LINK)][url=]肩胛舌骨肌[/url]，二腹肌后腹，胸锁乳突肌，沿胸锁乳突肌内缘分离筋膜以显露颈总动脉近心端，并由近心端向远心端小心分离，完整显露颈总动脉及分支，颈外动脉及分支，部分颈内动脉及其分支翼腭动脉，电凝颈外动脉的分支甲状腺上动脉及枕动脉，于颈外动脉远心端接近分叉处结扎，动脉夹夹闭颈总动脉近心端及颈内动脉，于颈外动脉远端处用显微剪刀剪开约1.5mm斜形口，并将5.0细线沿切口处插入颈外动脉直至颈总动脉，单结固定颈外动脉，打结时要注意松紧度，既要保证不出血，又要有一定的通过度，满意后退线并与颈外动脉一同将细线向下外侧牵拉并调整角度，向颈内动脉送线，送入长度约12-15mm，如造模成功会观察到小鼠呼吸深大，频率减慢，心率加快，此时退线，结扎颈外动脉残端，松开动脉瘤夹，见无活动性出血后逐层缝合，消毒后将小鼠至于36.0±0.5摄氏度保温板上复苏。

三、评价指标

1、SAH模型严重程度的形态学评估

采用Takashi Sugawara 等对SAH动物模型严重程度的评估方法，SAH造模后24小时取脑，将基底池分6个部分：桥脑尾侧二分之一，桥脑头侧二分之一，左右大脑半球两部分又被Willis 环中点水平线分割成头尾两部分，每个部分按照出血严重程度评0～3分，没有出血评0分；少量出血1分；中等量出血，动脉轮廓可辨认2分；大量出血，无法分清动脉轮廓3分，满分18 分，最低0分。依照6个部分的得分总和将SAH模型分为3个等级：0～7分：轻度出血；8～12分：中度出血；13～18分：严重出血。剔除轻度出血小鼠模型。

2、造模后神经功能学评估

1995 年 Julio H. Carcia等提出的神经功能评分后来又经 Takashi Sugawara 等改良现已广泛应用于SAH后的评估详见表1。此外，平衡木评分也用于 SAH 造模后神经功能的评估，平衡木评分是在长度90cm，宽度1cm两个平板间的横木上进行，受试小鼠分别在两边平板上放置10s以熟悉环境，再把小鼠放置在平板中间，观察其移动，详见表2。

表1 改良的加西亚评分表

表2 平衡木评分