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[分享] Western Blot中怎样使用内参呢?

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发表于 2023-8-2 13:50 | 显示全部楼层 |阅读模式

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在Western Blot实验过程中使用的内参的方法有:
超级简便的标记内参使用法:只要在二抗孵育时加入[color=var(--weui-LINK)][url=]HRP[/url]标记内参抗体(一抗孵育时不加抗体,即HRP直接标记于内参一抗上),按照正常操作即可。
普通内参:当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量相差不大时,可以先进行目的蛋白的抗体温育显色和检测。然后使用Strip缓冲液洗掉膜上的抗体,重新进行内参蛋白的抗体温育、显色检测。
当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量大小相差比较明显情况下,可以在转膜后预染,根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分,使内参蛋白与目的蛋白分开。然后两块膜分别与内参蛋白抗体以及目的蛋白抗体进行温育,二抗温育以及显色。

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